ГОСТ 33463.6—2016
8.4.2 Ускоренные методы выявления энтерококков с использованием готовых
питательных сред на подложках
Подложкус питательнойсредой, разрешенной к применению в соответствии с8.1.6, готовятк ана
лизу в соответствии с техническойдокументацией наподложку.
Пробы воды фильтруют в соответствии с приложением Е. Фильтры стерильным пинцетом накла
дывают на подложку и помещают в инкубаторили термостат.
Посевы инкубируют при температуре (36
±
2) X в течение 18—24 ч.
Идентификацию энтерококковсреди выросшихколонийпроводят поморфологии, цвету колоний в
соответствии с технической документацией на подложку (в зависимости от используемой питательной
среды).
Обработка по 8.2.1.3.
8.4.3 Сигнальный метод определения энтерококков
Навеску питательной среды для определения энтерококков вносят в 100 см3 исследуемой воды и
тщательно перемешиваютдополногорастворения. Посевы инкубируютвтечение 18—24 чпри темпера
туре (36
±
2) X .
П р и м е ч а н и е — Допускается в соответствии сприлагаемой инструкцией производителя инкубирование
посевов при температуре от 20 “С до 25 ‘С в течение 48 ч.
После инкубации посевов проводятучет результатов, при этом считают, что:
- энтерококки отсутствуют, если цвет среды не изменился или отмечено помутнение среды без
изменения цвета;
- бактерии обнаружены, если среда приобрела цвет, описанный в инструкции производителя во
всем объеме или верхнем слое. При перемешивании цвет среды недолжен измениться.
8.5 Определение колифагов прямым методом
8.5.1 Общие положения
Показатель «Колифаги» предназначен для проведения текущего контроля качества питьевой
воды в отношении возможного вирусного загрязнения.
Методоснован на предварительном накоплении колифагов в средеобогащения на культуре E.coli
и последующем выявлении зон лизиса (просветления) посева газоном E.coli на питательном агаре.
8.5.2 Подготовка тест — культуры E.coli К12F+ Str-r
На всех этапах исследования используют бактериальную взвесь, приготовленную следующим
образом: культуру E.coli K12F+ Str-r засевают в пробирку на скошенный питательный агар. Через (18
±
2)ч инкубации при температуре (36
±
2) X производят смыв бактерий с косяка 5см3стерильного
физиологического раствора и постандарту мутности готовят взвесь E.coli в концентрации 109бактери
альных клетокв 1см3.
П р и м е ч а н и е — Допускается использование 4-часовой бульонной культуры E.coli К12 F* Str-r. получен
ной при температуре инкубации (36
±
2) °С. для внесения в питательный агар, расплавленный и остуженный до
(44.0
±
0.5) ‘С. Концентрация 10э бактериальных клеток E.coli содержится в 2 см3 питательного бульона.
8.5.3 Выполнение анализа
В исследуемую пробу воды объемом 100 см3 вносят 10 см310-кратного питательного бульона и
1см3 подготовленногосмыва тест-культуры или2 см34-часовойбульонной культуры.
Для контроля культуры 0.1 см3смыва бактерий E.coli (или 0.2 см34-часовой бульонной культуры)
помещают в чашку Петри изаливают питательным агаром.
Исследуемую пробу воды (100 см3) и чашку Петри с контролем E.coli помещают в термостат при
температуре (36
±
2) X на (18
±
2) ч.
В зависимости от плотности используемого агара проводят посевы воды по 10см3на 10 чашекили
по20см3на 5 чашек. Для освобожденияисследуемой водыотсопутствующейбактериальнойфлоры, ее
обрабатываютхлороформом из расчета 1см3хлороформа на 10см3воды. Пробутщательновстряхива
ютиотстаивают в течение 15 мин при комнатнойтемпературедля осажденияхлороформа. На исследо
вание берут воду над хлороформом. В питательный агар, расплавленный и остуженный до (44.0
±
0.5) X . добавляют смыв E.coli K12F* Str-r (см. 8.5.2) из расчета 1.0 см3смыва на каждые 100 см3 агара,
после чего перемешивают. Для контроля культуры E.coli на возможную контаминацию ее посто ронними
колифагами в однучашку Петри вносят 10 см3стерильной водопроводной воды, прогретойдо
температуры от 20 X до 25 X , заливают 25 см3приготовленного агара с E.coli K12F* Str-r и осторожно
перемешивают.
и