ГОСТ 33463.6—2016
Модификацию среды Эндо с добавлением розоловой кислоты используют только при работе методом мем
бранной фильтрации.
Д.5 Приготовление хромокультколиформ агара для ускоренного одновременного определения
Е. coll и колиформных бактерий в одном посеве
Агар готовятиз сухого препарата, разрешенного к применению по 8.1.6. по способу, указанномупроизводите
лем.
Нагревают навеску агара на кипящей водяной бане, периодически помешивая, до полного растворения час
тиц в течение 35 мин. Не допускается автоклавировать и перегревать.
Готовую среду охлаждают до температуры (45—50) °С и разливают в чашки Петри.
Срок хранения питательной среды при температуре от 2 °С до 8 °С в защищенном от света месте — не более
21 сут.
Для предотвращения от высыхания чашки со средой рекомендуется поместить в пластиковые мешки.
Готовая среда должна иметь желтоватый цвет.
Д.6
Л
актозо-пептонная среда
10 гпептона. 5г натрия хлористого. 5г лактозы растворяютпри нагревании в 1л дистиллированной воды. Пос
ле растворения ингредиентов устанавливают pH 7.4—7.6. разливают по 10 см3в пробирки, стерилизуют при
(112 * 2) *С 12 мин.
Для приготовления концентрированной лактозо-пелтонной среды все ингредиенты, кроме воды, увеличива
ют в 10 раз. разливают по 1см3 а пробирки и по 10 см3во флаконы.
Д.7 Питательные среды для подтверждения способности ферментировать лактозу до кислоты и газа
Д.7.1 Полужидкая среда с лактозой из сухого препарата
Готовят по способу, указанному на этикетке.
Срок хранения — не более двух недель при комнатной температуре.
Посев производят уколом до дна пробирки. При образовании кислоты цвет питательной среды изменяется в
соответствии с использованным индикатором. При газообразовании газ скапливается по уколу или на поверхности,
или в толще среды появляются разрывы. При инкубации посевов более 5 ч газ может улетучиться. В таких случаях на
присутствие газа указывают оставшиеся в толще среды «карманы» — потемнения среды на месте бывшего
пузырька газа.
Д.7.2 Полужидкая среда с лактозой
Готовят при отсутствии сухого препарата.
В 1л дистиллированной воды растворяют 10 гпептона. 5 г натрия хлористого. (4—5)г агар-агара, доводятдо
кипения. устанавливаютрН 7.2—7.4. добавляют 1 см31.6%-ного спиртового раствора бромтимолового синего. Сте
рилизуют при температуре (120
±
2) “С 20 мин. В расплавленную среду вносят 5 г лактозы, нагревают до кипения,
разливают астерильные пробирки на высотуот 3до 5см истерилизуют при (112
±
2) ‘С 12 мин. Срокхранения — не
более двух недель при комнатной температуре.
Готовая среда имеет зеленый цвет с синеватым оттенком. При образовании кислоты цвет среды изменяется
на желтый.
Д.8 Реактивы для оксидазного теста
Д.8.1 вариант 1
1 %-ный водный раствор тетраметил-п-фенилендиамина гидрохлорид. Готовят непосредственно перед
использованием.
Д.8.2 Вариант 2
Реактив № 1:1 %-ный спиртовой раствор «-нафтола.
Реактив №2:1 %-ный водный раствор фемклендиаминового соединения.
Растворы сохраняют в темных флаконах с притертыми пробками:
1— до одногомесяца. 2 — доодной недели. Перед употреблением ктрем частям первого раствора добавля
ют семь частей второго раствора.
Могут быть использованы коммерческие тест-системы для постановки оксидазного теста.
Перед работой с каждой серией проб реактивы или тест-системы на оксидазу следует испытывать на эталон
ных тест-микроорганизмах, дающих положительную (Р. aeruginosa или Р. fluorescens) и отрицательную оксидазную
реакцию (Е.coll).
Д.9 Приготовление энтерококкагара
Д.9.1 Энтерококкагар готовят из сухого препарата по способу, указанномупроизводителем.
При приготовлении следует обратить внимание на следующие приемы, необходимые для предохранения от
разрушения ТТХ при нагревании:
26