ГОСТ 33463.6—2016
8.5.6 Методика подтверждения фаговой природы лизиса
С целью подтверждения фаговой природы лизиса бактериологической петлей извлекают участок
агара с бляшкой колифага, вызывающей сомнение, помещают его в 5 см3питательного бульона, куда
добавляют каплютест-культуры E.coli К12F* Str-rиинкубируют при(36 • 2) °С втечение (18
±
2)ч. Полу
ченную культуру обрабатывают хлороформом или фильтруют через мембранный фильтр и исследуют
на наличие фага. Высевосуществляют петлей или пипеткой на поверхность питательного агара содер
жащего взвесь E.coli. чашки инкубируют в термостате при (36
1
2) °С в течение (18 ♦2) ч. Наличие зон
лизиса на поверхности агара расценивается какподтверждение наличия фага.
8.6 Определение Р. aeruginosa
8.6.1 Метод 1
При обнаружениинамембранномфильтре, помещенномнасредуЭндо, припосевепробыводы на
колиформные бактерии и(или) E.coli роста изолированныхоксидазоположительных бактерий проводят
определение показателяР. aeruginosa иустанавливают«наличие-отсутствие» этихбактерий висследо
ванной пробе воды.
Для подтверждения показателя Р. aeruginosa снимают с фильтра 2—3 изолированные колонии и
производят посев на чашку Петри со средой «Блеск» путем укола, затем культуру растирают вокругуко ла
ввидебляшкидиаметром от2.0до 2,5см. Послечегопосевыинкубируютвтермостате притемперату ре
(36 л 2) °С в течение (24
±
2)ч.
В случае сливного или сплошного роста оксидазоположительных бактерий проводят рассев на
чашки Петри с питательным агаромсцельюполучения чистой культуры, посевы инкубируютв термоста
те при температуре (36 л 2) "С в течение (24
±
2) ч. После чего повторяют процедуру посева на среду
«Блеск».
При наличии роста насреде «Блеск» темно-малиновых колоний с золотыми вкраплениями, имею
щих специфический сладковатый цветочный запах, и подтверждении наличия диффундирующего пиг
мента на скошенном питательном агаре отмечают наличие Р.aeruginosa в исследуемой пробе воды.
8.6.2 Метод 2
Обнаружение Р.aeruginosa в пробе воды состоит из трехэтапов:
- накопление в жидкой среде обогащения;
- выделение Р. aeruginosa на плотной селективно-дифференциальной среде;
- идентификация Р. aeruginosa с использованием ограниченного набора наиболее надежных тес
тов.
Исследуютпробу воды объемом 1000см3. Вкачествесреды накопленияиспользуют минеральную
среду Бондес кристаллическим фиолетовым.
В две стерильные емкости мерно наливают по 50 см3 концентрата среды Бонде и по 2.5 см3
0.01 %-ного водногораствора кристаллическогофиолетового, послечегов каждуюемкостьналиваютпо
500 см3 пробы воды.
Инкубацию посевов осуществляют при температуре (36 л 2) °С в течение промежутка времени
от24до48ч.Через24чпосевыпросматривают. При отсутствиипленки ипомутнениясреды посевы инку-
бируютдо48ч.Отсутствиеростав среденакоплениячерез48чпозволяетвыдатьотрицательныйответ.
При помутнении среды «Бонде» и образовании на поверхности тонкой прозрачной пленки, подни
мающейся по стенке емкости, проводят пересев из среды обогащения на сектора плотной среды
«Блеск» или цетримидный агар или азидной среды. Емкость перед посевом не встряхивают. Бактерио
логическойпетлей забираютпленкус поверхностисреды ипроизводятпосевуколом ближеккраючашки
Петридля снятия излишков посевного материала, потом остатокматериала распределяютв виде бляш ки
диаметром от2,0до2,5см. далее посевпроводятчастымимногочисленнымиштрихамипоповерхнос ти
среды для получения максимального количества изолированных колоний. Посевы помещают в
термостат при (36 л 2) °Сна время от24до 48 чс предварительным просмотром через 24 чинкубации.
На цетримидном агаре колонии Р. aeruginosa образуютжелтовато-зеленый пигмент (пиоциаиин),
флуоресцирующий в ультрафиолетовом свете (УФ-свете). При нечетком результате проводят иденти
фикацию подополнительным тестам.
На среде «Блеск» колонии Р.aeruginosaсплошь покрытызолотистым налетомлибо содержатмно
гочисленные золотистые вкрапления. Иногда вокруг колонии отмечается просветление или свет ло-
красное окрашиваниесреды. Часто колонии Р. aeruginosa принимают веретенообразную форму, как бы
распространяясь по вдавлению в агаре от штриха петлей. Появление блеска можно наблюдать уже
через (2111)ч инкубации при температуре (36 л 2) °С. но максимальное проявление блескадостигает
ся через (43
±
1)ч. Среда «Блеск» является ингибиторнойдля всех грамположительных и большинства
13