ГОСТ 33463.6—2016
Исследуемые объемы воды вносят в стерильные чашки Петри и заливают, слегка приоткрывая
крышки, 25см3смесиагарас кишечной палочкой. При посевепробы водыобъемом 100 см3еепредвари
тельно нагреваютдо температуры (20—25) °С.
Содержимое чашек осторожно перемешивают и оставляют при комнатной температуре до
застывания. Чашкис застывшим агаромпомещаютвтермостатдном вверх иинкубируютпри температу
ре (36
±
2) вС в течение (18 1 2)ч.
8.5.4 Учет результатов
Просмотр посевовосуществляется в проходящем свете.
При исследовании 100 см3воды (5чашекпо20см3)подсчитывают исуммируютвсе бляшки, вырос
шие начашках Петри.
Если посевнаядоза была меньше 100 см3, то число колифагов вычисляют по формуле
где а — сумма бляшек начашке;
р■— /-е разведение.
п — количествор(разведений.
Результаты выражают в бляшкообразующих единицах (БОЕ) на 100 см3пробы воды. В контроль
ной чашке бляшки должны отсутствовать.
Предварительный учет результатов можно проводитьчерез промежуток времени от 5до 6 ч инку
бации. На этомэтапе при наличиичеткихзон лизисаможетбытьвыдан предварительный ответоприсут
ствии колифагов в воде.
Окончательный количественный учет прямого посева проводится через (18 А 2) ч. Результаты
выражают количеством бляшкообразующих единиц (БОЕ) на 100 см3 пробы воды.
Еслиотмеченсливнойростбляшекисчет затруднителен, топоданным прямого посева можетбыть
выдан качественный результат; «Обнаружено в 100см3 воды».
При наличии зон лизиса в контрольной чашке результат исследования считается недействитель
ным.
8.5.5 Постановка контролей
«Отрицательный контроль» — подтверждает отсутствие контаминации фагом питательныхсред,
лабораторной посуды, оборудования на этапах подготовки и проведения анализа, а также позволяет
оценитьспособность тест-культуры E.coli давать равномерный газон.
«Отрицательным контролем» служит исследование стерильной водопроводной воды, проводи
мое аналогично анализируемой пробе воды. С этой целью, в зависимости от посевной дозы исследуе
мой воды, в стерильную чашку Петри вносят от 1до 20 см3стерильной водопроводной воды, заливают
смесью мясо-пелтоиногоагара с E.coli и инкубируют в течение 18—20ч при температуре (36
±
2) °С.
В случае обнаружения бляшек колифагов в чашках с «отрицательным» контролем результаты
исследования всей серии проб воды недействительны.
Следует проверить стерильность лабораторного оборудования, посуды, питательных сред, а так
же повторить контрольный посев нализогенность тест-штамма E.coli К12 F *Str-r.
Для проверки культуры на лизогенность необходимо использовать новую пробирку с культурой,
хранящейся на полужидком агаре. 1см3бактериальной взвеси помещают в стерильную чашку Петри и
заливают расплавленным и остуженным до температуры в диапазоне от 45 °С до 49 °С питательным
агаром, инкубируютпри температуре (36 *2) °С в течение (18
±
2)ч.
Просмотр посевов осуществляют в проходящем свете. Наличие зонлизиса в контрольном посеве
свидетельствует оспонтаннопроявившемся свойстве культуры продуцироватьфаги или контаминации
ее колифагом в процессе работы.
Использование в работе лизогенной культуры запрещается. Необходимо получить новую лиофи-
лизированную культуру.
у
_
з
100
v
(3)
где а — сумма бляшек начашках;
V — объем исследуемой воды.
При исследовании децинормальных разведений, число колифагов в 100 см3воды вычисляют по
формуле
(4)
12