ГОСТРИСО 29701—2015
6.4 Хранение испытуемой пробы
Во избежание разрушения эндотоксинов и/или роста бактерий приготовление испытуемой пробы
рекомендуется осуществлять непосредственно перед проведением ЛАЛ-теста.
В случае если сразу провести ЛАЛ-тест невозможно, то хранение испытуемой пробы осуществля
ют в стерильных герметичных контейнерах (см. 4.2) при температуре от 2 до 8 ’"С. В случае хранения
испытуемой пробы более 24 ч выполняют проверку ее стабильности и однородности. Требования к
хранению испытуемых проб должны быть установлены в программах и методиках испытаний.
6.5 Условия проведения отбора, подготовки проб и испытаний
6.5.1 Воздух окружающ ей среды
Требования к чистоте воздуха окружающей среды в рабочих зонах и помещениях в целом, пред
назначенных для проведения отбора, подготовки проб и испытаний, должны быть установлены в про
граммах и методиках испытаний.
Отбор, подготовку проб и испытания следует проводить в вытяжном шкафу или помещениях, ос
нащенных оборудованием, обеспечивающим класс чистоты 5 ИСО (2] — [4].
6.5.2 Посуда, оборудование и материалы
Для отбора, подготовки проб и проведения испытаний используют посуду, оборудование и мате
риалы НСЭ. Для удаления эндотоксинов посуду, оборудование и материалы подвергают термической
обработке при температуре не менее 250 °С в течение 30 мин. Термическую обработку посуды, обо
рудования и материалов допускается выполнять при других значениях температуры, например про
водить термическую обработку при температуре 180 X в течение 3 ч или при температуре 650 °С в
течение 1 мин. Требования к условиям термической обработки посуды, оборудования и материалов
должны быть установлены в программах и методиках испытаний. Посуду, оборудование и материалы,
непригодные для термической обработки, вымачивают в растворе щелочи или кислоты, затем промы
вают водой и проверяют на содержание эндотоксинов. Требования к обработке посуды, оборудования и
материалов щелочью или кислотой должны быть установлены в программах и методиках испытаний.
Допускается применять стерильные пластмассовые посуду и оборудование (например, контейнеры,
пробирки, наконечники для микропипеток) однократного применения.
П р и м е ч а н и е — Пластмассовые материалы, посуда и оборудование, применяемые для отбора, подго
товки проб и проведения испытаний, должны быть изготовлены из полистирола.
6.5.3 Вода, используемая для промывки посуды, оборудования и материалов
Посуду, оборудование и материалы после обработки растворами щелочи или кислоты промывают
дистиллированной водой НСЭ [11].
7 Методы испытаний
7.1 Сущ ность ЛАЛ-теста
Эндотоксины, активируя фактор в ЛАЛ-реактиве. запускают протеолитический каскад [12]. Свер
тывающий фермент, высвобождаемый из профермента одним из активных факторов, катализирует
протеолиз коагулогена в ЛАЛ-реактиве. Образующиеся в результате протеолиза фрагменты коагулоге-на
— коагулины — взаимодействуют друг с другом посредством дисульфидных связей, вызывая помут нение
прозрачного испытуемого раствора и увеличение его вязкости вплоть до формирования плотного геля.
Образование плотного геля служит индикатором наличия в испытуемой пробе эндотоксинов. Про
водимый таким образом анализ называют гель-тромб тестом. Результат испытаний наноматериалов
гель-тромб тестом (образование плотного геля, который не разрушается при аккуратном однократном
переворачивании пробирки) определяют визуально.
Гель-тромб тест — наиболее простой и экономичный метод испытаний, при проведении которого
не требуется применение спектрофотометра. Чувствительность гель-тромб теста с использованием го
товых реактивов составляет 0,015 ЕЭ/мл. Гель-тромб тест является основным методом испытаний по
выявлению наличия и определению количественной концентрации эндотоксинов в наноматериалах.
Допускается проводить испытания наноматериалов альтернативными методами при условии, что
ре зультаты не противоречат результатам основного метода.
П р и м е ч а н и е — Описание гель-тромб теста приведено в приложении В.
4