ГОСТР ИСО 29701— 2015
5 Испытуемая проба
5.1 Водная суспензия наноматериала
В качество испытуемой пробы в ЛАЛ-тесте применяют водную суспензию, полученную путем дис
пергирования пробы наноматериала в воде для ЛАЛ-теста НСЭ.
5.2 Экстракт наноматериала
В качестве испытуемой пробы в ЛАЛ-тесте применяют экстракт наноматериала, полученный пу
тем экстрагирования пробы наноматериала в экстрагирующем растворе (например, физиологическом
растворе).
6 Приготовление испытуемой пробы
В программах и методиках испытаний должны быть установлены требования к приготовлению
испытуемых проб. Сведения о применяемых методах отбора и подготовки пробы регистрируют в про
токоле испытаний.
6.1 Метод диспергирования
Приготовление испытуемой пробы методом диспергирования выполняют с учетом цели испыта
ний и требований, установленных для испытаний с использованием конкретной тест-системы
in vitro.
Пробу наноматериала измельчают вручную, механизированным способом или ультразвуком, затем
диспергируют в воде для ЛАЛ-теста НСЭ.
П р и м е ч а н и е — Следует учитывать, что процесс диспергирования может быть затруднен вследствие
наличия у наноматериалов таких характеристик, как большая удельная площадь поверхности, пористость,
гидрофобность.
6.2 Метод экстрагирования
Приготовление испытуемой пробы методом экстрагирования выполняют с учетом требований,
установленных для испытаний с использованием конкретной тест-системы
in vitro.
Экстрагирующие
растворы, время и температура инкубирования, концентрация испытуемой пробы должны соответство
вать требованиям, установленным для испытаний с использованием конкретной тест-системы
in vitro.
Для контроля значений pH не рекомендуется применять феноловый красный индикатор, влияющий на
цвет раствора. Контроль значений pH следует выполнять с применением буферных растворов. Для
подготовки испытуемой пробы допускается применять готовые сертифицированные или самостоятель но
приготовленные из реактивов НСЭ экстрагирующие растворы НСЭ. Во избежание роста бактерий и
плесневых грибов допускается в экстрагирующие растворы добавлять антибиотики и фунгициды.
Следует учитывать, что применяемые антибиотики и фунгициды могут являться мешающими факто
рами и оказывать влияние на результаты ЛАЛ-теста (см. 7.3.3). После проведения экстрагирования
полученную смесь центрифугируют с целью удаления частиц. Образовавшийся супернатант переносят с
помощью пипеток в пробирки или контейнеры. Отобранный супернатант представляет собой экстракт
наноматериала.
П р и м е ч а н и я
1 Для удаления эндотоксинов со стекловолоконных фильтров, применяемых для фильтрации проб, можно
использовать 0,05% полиоорбат 20 [9].
2 Для удаления эндотоксинов из углеродных наноматериалов рекомендуется применять поверхностно-ак
тивные вещества, например раствор витамина Е массовой долей 0.1% (d-a-токоферол полиэтиленгликоль-1000
сукцината) [10].
3 При приготовлении испытуемой пробы методом экстрагирования допускается использовать дополнитель
ные сведения [1].
6.3 Концентрация наноматериала в испытуемой пробе
Концентрация намоматериала в испытуемой пробе должна быть максимально высокой и соот
ветствовать требованиям, установленным для испытаний с использованием конкретной тест-системы
in
vitro.
3