ГОСТРИСО 29701—2015
Приложение С
(справочное)
Фотометрический метод по конечной точке (хромогенный метод по конечной точке)
С.1 Общие сведения
В настоящем приложении приведено описание фотометрического метода по конечной точке с использовани
ем ЛАЛ-рвактива с хромогенным субстратом Boc-Leu-Gly-Arg-p-NA или Boc-Thr-Gly-Arg-p-NA (хромогенный метод
по конечной точке). Количественное содержание p-NA в растворе определяют по значению ОП p-NA при длине
волны 405 нм.
С.2 Реактивы
С.2.1 Лиофилизированный ЛАЛ-реактив с заявленной чувствительностью
а
. предназначенный для хромо
генного метода.
С.2.2 Буферный раствор для ЛАЛ-рвактива.
С.2.3 Лиофилизированный КСЭ.
С.2.4 Вода для ЛАЛ-теста НСЭ.
С.2.5 Раствор, замедляющий или останавливающий реакцию (информация должна быть приведена изгото
вителем в инструкции к ЛАЛ-реактиву).
П р и м е ч а н и е — Все реактивы можно приобрести в наборах для проведения ЛАЛ-теста, имеющихся 8
продаже.
С.З Оборудование
С.3.1 Стеклянные пробирки НСЭ или микролланшеты НСЭ из полистирола.
П р и м е ч а н и я
1 Подготовку посуды, оборудования и материалов, применяемых в фотометрическом методе по конечной
точке, проводят в соответствии с 6.5.2.
2 Оборудование, материалы, контейнеры и флаконы с веществами НСЭ. применяемые в фотометрическом
методе по конечной точке, маркируют как апирогенные.
С.3.2 Стеклянные пробирки НСЭ или пробирки и контейнеры НСЭ из полистирола для приготовления ис
пытуемых растворов.
П р и м е ч а н и я
1 Подготовку посуды, оборудования и материалов, применяемых в фотометрическом методе по конечной
точке, проводят в соответствии с 6.5.2.
2 Оборудование, материалы, контейнеры и флаконы с веществами НСЭ. применяемые в фотометрическом
методе по конечной точке, маркируют как апирогенные.
С.3.3 Штативы для пробирок.
С.3.4 Пипетки, автоматические пипетки, наконечники пипеток, шприцы однократного или многократного при
менения НСЭ.
С.3.5 Водяная баня или термостат для инкубирования, обеспечивающие поддержание температуры (37±1) "С.
С.3.6 Вихревой миксер.
С.3.7 Спектрофотометр или микропланшетный фотометр для измерений ОП при длине волны 405 нм.
С.3.8 Хронометр или другое средство для измерения времени.
С.4 Приготовление испытуемых растворов для построения стандартной кривой
С.4.1 Приготовление базового раствора эндотоксинов
Для приготовления базового раствора эндотоксинов применяют лиофилизированный КСЭ. Содержимое
флакона с КСЭ разбавляют водой НСЭ. Разведение и хранение КСЭ осуществляют в соответствии с инструкцией
изготовителя.
С.4.2 Приготовление стандартных растворов эндотоксинов
Стандартные растворы эндотоксинов получают путем разведения базового раствора эндотоксинов водой
НСЭ. Следует приготовить не менее трех стандартных растворов эндотоксинов, содержащих КСЭ различной кон
центрации. включая раствор с содержанием КСЭ концентрацией, соответствующей заявленной чувствительности
ЛАЛ-реактива. С целью минимизации ошибок при аликвотировании следует учитывать, что получаемые
стандарт ные растворы (при любом факторе разведения базового раствора) должны содержать КСЭ.
разбавленный водой не более чем в 10 раз.
12