ГОСТ Р 56698—2015
6.3 Овариальный цикл
Длительность и нормальность овариального цикла оценивается у самок поколения Р и F1 по
вагинальной смазке до начала спаривания, и. если предусмотрено планом, в течение спаривания, до
получения доказательств совокупления. При получении образцов клеток вагины/шейки матки следует
принимать меры по предупреждению повреждения слизистой и, как следствие, индукции псевдобе-
ременмости [2].
6.4 Характеристики спермы
6.4.1 У всех самцов поколений Р и F1 после эвтаназии должны быть зарегистрированы масса
яичек и эпидидимиса, и один из органов должен в дальнейшем подвергнуться гистопатологическому
исследованию (6.7.1, 7.1.1, 7.1.3). Из подгруппы количеством не менее 10 мужских особей из каждой
опытной группы самцов поколений Р и F1 оставшиеся яички и эпидидимисы должны быть использо
ваны для подсчета устойчивых к гомогенизации сперматидов и резервов спермы отростков эпидиди
миса
(cauda epididymides)
соответственно. У этого количества самцов должна быть отобрана сперма
из
cauda epididymides
или семявыводящего канала для оценки подвижности спермы и морфологиче
ского исследования. Если обнаружены токсические эффекты исследуемого вещества или имеются
данные других исследований о его возможном влиянии на сперматогенез, то оценка спермы должна
быть проведена у всех самцов во всех опытных группах; в других случаях количественные оценки мо
гут быть проведены только у самцов поколений Р и F1 контрольной группы и групп, получающих са
мую высокую дозу.
6.4.2 Общее количество устойчивых к гомогенизации сперматидов яичек и спермы
cauda
epididymides
должно быть посчитано [3), [4]. Резервуары спермы могут быть определены по концен
трации и объему спермы в суспензии, использованной для качественных оценок, и количеству спер
матозоидов, полученных при последующем измельчении и/или гомогенизации оставшейся ткани
cauda
(хвоста). Количественный подсчет следует проводить на отобранной подгруппе животных из
всех опытных групп непосредственно после эвтаназии животных, если не проводится видео- или
цифровая запись или если образцы не подвергаются заморозке для последующего анализа. В этих
случаях первыми могут быть изучены образцы от животных из контрольной группы и группы, полу
чавшей наивысшую дозу исследуемого вещества. Если связанные с веществом эффекты на сперму не
обнаружены (например, влияние на количество сперматозоидов, их подвижность или морфоло гию).
то исследование образцов тканей животных других групп проводить не обязательно. Если эф фекты
выявлены у животных, получавших наивысшую дозу, то животные с более низкими дозами также
должны быть изучены.
6.4.3 Подвижность сперматозоидов эпидидимиса (или из спермовыводящего канала) следует
оценивать или фиксировать на видео непосредственно после эвтаназии. Процедура получения спер
матозоидов должна обеспечивать их минимальное повреждение, разведение для анализа подвижно
сти получают с помощью приемлемых методов (5). Процент прогрессивно подвижных сперматозоидов
следует определять субъективно или объективно. При проведении анализа движения компьютеризи
рованными методами [6) — [11] определение прогрессивной подвижности основано на определяемой
оператором норме для средней скорости пробега и индекса линейности или прямого движения. Если
образцы снимают на видео [1] или регистрируют изображение другими методами в момент вскрытия,
далее может быть проведен анализ тканей самцов поколений Р и F1 только контрольной группы и
группы с наивысшей дозой, если токсическое фертильное действие исследуемого вещества не обна
ружено; в противном случае, также должны быть исследованы образцы из других групп. При отсут
ствии видеозаписи или цифрового изображения все образцы из всех опытных групп должны быть ис
следованы при вскрытии.
6.4.4 Должно быть проведено морфологическое исследование образцов спермы эпидидимиса.
Сперматозоиды (не менее 200 на образец) должны быть исследованы как фиксированные мокрые
препараты [13] и оценены как нормальные или с наличием отклонений. Образцы с отклонениями мо гут
включать слияние клеток, изолированные головки, неправильную форму головки и/или хвостов.
Исследование следует проводить на отобранной подгруппе животных из всех опытных групп непо
средственно после эвтаназии животных, если не проводится видео- или цифровая запись, которая
может быть проанализирована впоследствии. Мазки после их фиксации также могут быть изучены
позднее. В этих случаях первыми могут быть изучены образцы от животных из контрольной группы и
группы, получавшей наивысшую дозу исследуемого вещества. Если связанные с веществом эффекты на
сперму не обнаружены (например, влияние на морфологию), то исследование образцов тканей
животных других групп проводить не обязательно. Если эффекты выявлены у животных, получавших
наивысшую дозу, то животные с более низкими дозами также должны быть изучены.
6