ГОСТ 33163— 2014
дистиллированной водой до метки.
Раствор готовят непосредственно перед применением.
Б.3.5 Приготовление раствора гваякола с содержанием 1000 мг/дм: (контрольный раствор)
Взвешивают на весах 1.0 г гваякола и растворяют в мерной колбе вместимостью 1000 см1 в
дистиллированной воде, доводят до метки и перемешивают.
Стерилизуют путем автоклавирования в течение 10 мин при температуре 120 "С.
Срок хранения раствора в холодильнике при температуре не более 10 °С - не более 1 мес.
Б.4 Обнаружение
Б.4.1 Для каждой группы исследуемых колоний готовят по пять пробирок с 2 см’ YSGVA-бульона.
Б.4.2 В первую пробирку с YSGVA-бульоном с помощью петли переносят несколько колоний (около 5-10.
в зависимости от их размеров) с посева YSG-arapa, культивированного при температуре (45 ± 1) “С так. чтобы
получилась умеренно густая суспензия. Тщательно перемешивают.
Б.4.3 Засевают положительную
(A. acidoterrestris)
и отрицательную (Л.
acidocaldarius)
контрольные
культуры вдополнительные YSGVA-бульоны. Тщательно перемешивают.
Б.4.4 Параллельно инкубируют еще два YSGVA-6ynbOHa без инокуляции: один используется в качестве
холостой пробы, а второй - для контроля гваякола. В пробирку для контроля на гваякол добавляют 100 мм’
раствора гваякола.
Б.4.5 Инкубируют все пробирки при температуре (45 ± 1) ‘С на водяной бане не менее 3 ч. Затем
охлаждают содержимое пробирокдо комнатной температуры.
Б.4.6 В каждую из трех пробирок с культурами последовательнодобавляют:
-1 см" фосфатного буфера;
- 20 мм’ раствора H;Oz:
- 20 мм’ раствора пероксидазы.
Б.4.7 Перемешивают содержимое пробирок и оставляют на 5-10 мин.
Б.4.8 Оценивают изменение цвета в пробирках и сравнивают с изменениями в контрольной пробе и
пробиркой с гваяколом:
- положительная пробирка с культурой (коричневый цвет);
- отрицательная пробирка с культурой (бледный бежево-коричневый цвет, но без изменений);
- холостая проба (бледный бежево-коричневый цвет, но без изменений);
- контрольная пробирка на гваякол (густой коричневый/оранжевый цвет).
Б.4.9 Записывают результаты теста на гваякол как положительные для пробирок, показавших
положительную реакцию, и как отрицательные для пробирок, показавших отрицательную реакцию.
Тест оценивают, как положительный или отрицательный для каждой группы исследованных колоний. Если
результат промежуточный, то исследование повторяют с применением более насыщенной посевной культуры и
соответствующих контрольных проб(положительной и отрицательной)или увеличивают период
культивирования.
12