ГОСТ 33163— 2014
Результат подтверждения - отрицательный.
9.2.4Если рост колоний на К-arape при температуре 45
С
отсутствует, то рост колоний
проверяют на YSG-arape при той же температуре.
Вероятность того, что вызывающие порчу штаммы бактерий рода
Alicyclobacillus
будут расти на
YSG-arape при температуре (65 ± 1) °С. минимальна. Если при температуре 65 °С наблюдается рост
колоний, то они не относятся к роду
Alicyclobacillus.
Результат подтверждения - отрицательный.
9.3 Окраска по Граму
Приготовление мазков из культур, выросших на поверхности питательных сред, и окраску их по
Граму проводят по ГОСТ 30425.
Бактерии рода
Alicyclobacillus -
грамположительные палочки*.
9.4 Проверка наличия спорообразования
9.4.1 Проверяют культуры, выросшие на ВДГ-агаре. на наличие у них спорообразования путем
просмотра с помощью фазово-контрастной микроскопии живого препарата, приготовленного методом
раздавленной капли или путем окрашивания препаратов по Граму по ГОСТ 30425 или используют
специальные красители для спор по ГОСТ 30425.
НаYSG-arape спорообразование бактерийрода
Alicyclobacillus
не происходит. Для
подтверждения наличия спор используют
ВАТ-
агар, со значением pH менее 4 ед. pH, чтобы
исключить рост прочих кислотоустойчивых спорообразующих бактерий, например.
В. coagulans.
Если в приготовленных препаратах с
ВАТ
-агара спор не обнаружено, то для инициации
образования спор проводят прогрев суспензий обнаруженных микроорганизмов (тепловой удар) по
8.1.3. После прогрева 0.1-0.2 см3 суспензии высевают на поверхность
ВАТ-
агара. Посевы
термостатируют по 8.1.5. затем готовят из выросших культур препараты для определения наличия
спор.
9.5 Колонии, которые образуют споры при 3,7 ед. pH и не растут при pH выше 6 ед. pH и
температуре 65 °С. идентифицируют как предполагаемые штаммы
Alicyclobacillus.
9.6 Проведение пероксидазного теста на гваякол (дополнительный тест)
Чашку с YSG-агаром (после культивирования при 45 °С) сохраняют для пероксидазного теста
на выявление гваякола (см. приложение Б).
По результатам дополнительного подтверждения к бактериям рода
Alicyclobacillus
относят
факультативно-анаэробные,образующиеспорыграмоположительныепалочки,дающие
положительную реакцию на гваякол.
9.7 Схемы выявления бактерий рода
Alicyclobacillus
в соковой продукции приведены в
справочных приложениях В и Г**.
* Возможна вариабельность (неоднородность) окрашивания для культур более 24 ч.
*• В приложениях В и Г при выявлении и определении количества спор бактерий рода
Alicyclobacillus
в
концентрированной и готовой соковой продукции проводят посев пробы соковой продукции, подвергнутой
тепловому удару.
8