Приложение Б
(рекомендуемое)
ГОСТ 33163—2014
Пероксидазный тест на подтверждение наличия гваякола
Б.1 Сущность
Пероксидазный гест может применяться для подтверждения способности исследуемых микроорганизмов
образовывать гваякол из ванилиновой кислоты. Такие виды, как A.
addoterrestris, A. acidiphHus. A. herbarius
и пр.,
могут давать положительные результаты в данном тесте, но необязательно будут продуцировать гваякол во
всей соковой продукции. Такие виды, как
A. acidocaldarius.
дают отрицательный результат в этот.» тесте.
Поскольку результаты могут варьироваться в зависимости от активности исследуемой культуры и видов, важно
включить в тест положительные и отрицательные контрольные культуры, т. е. A.
acidoterrestris
и A.
acidocaldarius,
соответственно, которые были выращены в тех же условиях, что и тестируемые колонии.
Определение основано на изменении цвета среды
YSG
с ванилиновой кислотой после реакции окисления
пероксидом водорода. Реакция окисления катализируется пероксидазой. Гваякол окисляется до органического
соединения красно-коричневого цвета, 3,3’-диметокси-4.4’-дифенилхинона (тетрагваякол) по следующей схеме:
Использование ySG-бульона с ванилиновой кислотой позволяет за короткий промежуток времени
накопить концентрации гваякола на уровне 10 мг/дм3.
Б.2 Средства измерений, вспомогательное оборудование, посуда и материалы
Средства измерений, вспомогательное оборудование, посуда и материалы - по разделу 6.
Б.З Приготовление реагентов*
Б.3.1 Для проведения лероксидазного теста на наличие гваякола используют следующие реактивы:
- кислота 4-гидрокси-2-метоксибензойная (ванилиновая). С„НяОч, с массовой долей основного вещества
не менее 97 %;
- пероксид водорода по ГОСТ 10929 с массовой долей пероксида водорода 29 % - 35 %;
- пероксидаза хрена, лиофилизированный препарат с показателем чистоты RZ
2
3. раствор с
ферментативной активностью 5 ЕУмг.
- кислота лимонная по ГОСТ 3652, раствор с массовой концентрацией 200 г/дм3, готовят по ГОСТ 10444.1;
- калий фосфорнокислый однозамещенкый по ГОСТ 4198 или двузамещенный 3-водный по ГОСТ 2493.
Б.3.2 Приготовление ySGVA-бульона с содержанием 250 мг/дм3ванилиновой кислоты
Взвешивают на весах 0,125 г ванилиновой кислоты и растворяют в стакане при перемешивании в 500 см3
ySG-бульона.
Стерилизуют бульон путем автоклавирования в течение 10 мин при температуре 120 "С. После
автоклавирования разливают по 2 см3в пробирки.
Б.3.3 Приготовление фосфатного буферного растовора
97 г двузамещенного фосфорнокислого натрия растворяют в мерной колбе вместимостью 500 см3 в
дистиллированной воде, доводят до метки и перемешивают.
Стерилизуют путем автоклавирования в течение 10 мин при температуре 120 °С.
Буферный раствор хранят в склянке из темного стекла с плотно закрытой пробкой - не более 1 мес.
Б.3.4 Приготовление раствора пероксида водорода с объемной долей 1 %
3.5 см3 пероксида водорода переносят пипеткой в мерную колбу вместимостью 100 см3и доводят обьем
* Набор для лероксидазного теста выпускается компаниями Doehier и Kyokuto Pharmaceutical Industrial Со Ltd.
Япония. Данная информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта, не является рекламой
указанных реагентов и не исключает возможность применения других наборов.
11