ГОСТ ISO 11930—2014
b) Начиная от разведения в нейтрализаторе 1/10 (или от 1/100. или другой кратности, если эф
фективность нейтрализатора установлена для разведения 1/100 или для другой кратности), выпол
няют серию последовательных десятикратных разведений в нейтрализаторе (см.5.2.2.2), чтобы вы
полнить подсчет количества клеток выживших микроорганизмов.
c) Через семь дней следует выполнить подсчет клеток микроорганизмов во всех полученных
разведениях в нейтрализаторе (1/10. а затем 1/100. или другом). Через 14 и 28 дней допускается
уменьшить количество разведений, в которых выполняется подсчет клеток микроорганизмов, исходя
из результатов измерения через семь дней.
d) Выполняют подсчет количества клеток микроорганизмов с помощью подходящей питатель
ной среды (TSA для бактерий. SDA для C.albicans и PDA для A.brasiliensis). Подсчет количества кле
ток проводят из двух параллельных высевов.
В чашки Петри диаметром от 85 до 100 мм вносят 1 см3из каждого разведения, и заливают 15 -
20 см3расплавленной питательной среды, выдерживаемой на водяной бане при температуре не бо
лее 48 °С. Осторожно перемешивают содержимое, поворачивая и наклоняя чашки Петри для равно
мерного распределения микроорганизмов. Дают застыть на горизонтальной поверхности при комнат
ной температуре.
Допускается применение других методов подсчета количества микроорганизмов (поверхност
ный посев и фильтрация мембраной). Их применение требует адаптации метода с учетом парамет
ров. указанных выше.
Для подсчета рекомендуется использовать 1 см3смеси, так как это повышает точность.
e) Бактерии и С. albicans выращивают при температуре (32.5 ± 2.5) °С в течение 48 - 72 ч,
A. brasiliensis выращивают при температуре (22.5 ± 2.5) °С в течение трех - пяти дней.
5.6.2 Подсчет колоний
После выращивания оценивают количество колоний в чашках. При всех подсчетах (см. 5.4.2.5,
5.4.3.5 и 5.6.1.4 с)] учитывают чашки, в которых обнаружено от 30 до 300 колоний бактерий и
С. albicans и от 15 до 150 колоний A. brasiliensis.
Когда количество колоний выживших клеток микроорганизмов, полученных, как описано в
5.6.1.4 с) перестанет входить в эти пределы [количество более 300 (150 для A. brasiliensis) или менее
30 (15 для A. brasiliensis)], фиксируют результат как > 300 (>150 для A. brasiliensis) или < 30
(<15 для A. brasiliensis).
Определяют количество жизнеспособных клеток микроорганизмов, присутствующих в пробе на
момент времени Ь (N0 = W/100) в соответствии с 5.6.3.2, и количество выживших клеток микроорга
низмов при взятии каждой пробы. N,. в соответствии с 5.6.3.3.
5.6.3 Расчеты
5.6.3.1 Общие положения
Эффективность нейтрализатора должна быть проверена согласно 5.5.4. а экспериментальные
данные должны соответствовать правилам, приведенным в 5.6.2.
5.6.3.2 Определение начального количества микроорганизмов Wn А/0
a) Получают N количество клеток микроорганизмов в калиброванных суспензиях (см. 5.4.2 и
5.4.3) в КОЕ/см3по формуле (1)
N = C(Vd),(1)
гдеС- среднее количество колоний (см. 5.6.2). подсчитанных на двух параллельных чашках Петри;
V-объем инокулята, помещенного в каждую чашку (1 см3, в соответствии с 5.4.2 и 5.4.3), см3;
d - кратность разведения испытуемого раствора.
Для бактерий Nдолжно быть в пределах от 1 * 107КОЕ/см3до 1 * 10®КОЕ/см3.а для С. albicans
и A. brasiliensis - от 1 * 106 КОЕ/см3до 1 * 107КОЕ/см3.
b
) Определяют N0количество клеток микроорганизмов, внесенных в продукт в момент времени
<опо формуле (2)
JV0 = JV/100.(2)
Для бактерий No должно быть в пределах от1 * 10s КОЕ/см3и 1 * 10аКОЕ/см3или г, а для С.
albicans и A. brasiliensis от 1 * 10* КОЕ/см3 до 1 * 105КОЕ/см3или г.
5.6.3.3 Подсчет количества клеток микроорганизмов в каждый момент взятия порций
(аликвот) образца, Nx
Определяют Nx количество микроорганизмов, в КОЕ/см3или г, в продукте в каждый момент взя
тия образца f, (Т7. Т14 или Т28), по формуле (3)
Nx = C /{V -d ),(
3
)
где С - среднее количество колоний (см. 5.6.2), подсчитанных на двух параллельных чашках Петри;
9