ГОСТ ISO 11930—2014
- Если присутствуют проросшие споры, раствор считают непригодным для эксперимента.
- Если мицелий обнаружен более чем в одном поле зрения из десяти, необходимо промыть от
фильтрованную суспензию путем ресуспендирования ео в растворе полисорбата 80 (см. 5.2.2.2.3) с
дальнейшим центрифугированием в течение 20 мин при 2000 д. Данную процедуру повторяют, по
крайней мере, два раза.
5.4.3.4 Доводят концентрацию спор в суспензии до количества в пределах от 1 * 10’Jслор/см3до
1 * 107спор/см3с помощью растворителя (см. 5.2 2.2) или другим подходящим способом.
П р и м е ч а н и е - Для регулирования концентрации спор рекомендуется использовать прибор для
подсчета клеток (например, гемоцитометр). Если используют счетную камеру, работу с ней осуществляют со
гласно инструкциям.
Суспензию используют в день приготовления. Допускается использовать суспензию и на сле
дующий день, если она хранилась при температуре от 2 °С до 8 "С, но при этом следует повторно
выполнить проверку на наличие проросших спор.
5.4.3.5 При выполнении эксперимента проверяют исходную концентрацию клеток в суспензии.
N. Выполняют серию десятикратных разведений калиброванной суспензии с помощью растворителя
(см. 5.22.2). Выполняют подсчет количества спор путем переноса 1 см3 подходящих растворов
(см. 5.6.2) на чашки Петри средой PDA. используя их подходящее количество. Выращивают при тем
пературе (22,5 ± 2.5) °С в течение трех-пятидией.
5.5Демонстрация эффективности нейтрализатора
5.5.1 Принцип
Выполняют проверку способности нейтрализатора в присутствии каждого микроорганизма
нейтрализовать антимикробное действие тестируемого состава, не вызывая ингибирование роста
тест-микроорганизмов.
Калиброванную суспензию клеток микроорганизмов (примерно Ю3КОЕ/см3) вводят в состав
нейтрализатора с добавлением массы продукта (экспериментальный образец) и без добавления мас сы
продукта (контрольный образец). Нейтрализатор считается эффективным, если количество клеток
микроорганизмов в инокуляте N, и в контрольном образце А/„, (смеси нейтрализатора и растворителя)
эквивалентно, а количество микроорганизмов в составе(смеси нейтрализатора и продукта) со
ставляет не менее 50 %(см. 5.5.4).
5.5.2 Процедура
Проводят эксперимент отдельно для каждого штамма.
a) Готовят раствор калиброванной суспензии клеток микроорганизмов [N от 1 * 10 КОЕ/см3до
1 * 10s КОЕ/см3 для бактерий, и от 1 * 106 КОЕ/см3 до 1 * 10т КОЕ/см3для С. albicans и A. brasiliensis
(см. 5.4.2 и 5.4.3)]. содержащий примерно 10’ КОЕ/см’ (инокулят).
b
) Помещают 1 г или 1 см3испытуемого продукта в 9 см3нейтрализатора (см. 5.2.2.3). Переме
шивают продукт путем встряхивания. При необходимости (т. е., если нейтрализатор окажется неэф
фективным). выполняют очередное десятикратное разведение в нейтрализаторе.
Прочие условия эксперимента не нормируют. Единственным требованием является наличие не
менее 1г или 1см3продукта, а также выполнение хотя бы одного десятикратного разведения.
c) Оставляют пробирки с экспериментальным образцом в течение (30 ± 15) мин при комнатной
температуре. Выполняют контрольное испытание, используя тот же нейтрализатор, заменив испыту
емый состав 1см3растворителя (см. 5.2 2.2).
d) В пробирку с экспериментальным образцом [содержащую десятикратно разведенный состав,
а если потребуется, то и более, см. 5.5.2 Ь)] и пробирку с контрольным образцом помещают по 1 см3
инокулята [см. 5.5.2 а)]. Окончательный объем должен составить 11 см3. Перемешивают.
e) Готовят контрольный инокулят. Добавляют 1 см3 инокулята [5.5.2 а)] к 10 см3 растворителя.
Окончательный объем должен составить 11 см3. Перемешивают.
f) В двух повторностях подсчитывают количество микроорганизмов в экспериментальном об
разце. контрольном образце и контрольном инокуляте, после культивирования в соответствующей
питательной среде (TSA для бактерий. SDA для С. albicans и PDA для A. brasiliensis).
П р и м е ч а н и е - Рекомендуется применять калиброванную суспензию объемом 1 см3, так как это по
вышает точность счета количества микроорганизмов в смесях.
д) Бактерии и С. albicans выращивают при температуре (32.5 ± 2.5) °С в течение 48 - 72 ч.
A. brasiliensis выращивают при температуре (22.5 ± 2.5) °С в течение трех-пяти дней.
7