ГОСТ 32587-2013
- длина................................................................ 40 мм;
- внутренний диаметр...........................................4 мм;
-размер сферических частиц.............................5мкм.
П р и м е ч а н и е - Допускается использование предколонок иных типоразмеров.
Допускается применение других средств измерений с метрологическими характеристиками и
вспомогательного оборудования с техническими характеристиками не хуже, а также материалов и
реактивов по качеству не ниже вышеуказанных.
6.4 Проведение испытаний
6.4.1 Общие положения
Испытания должны быть проведены в течение одного рабочего дня.
6.4.2 Экстракция охратоксина А из пробы
Помещают (20.0 ± 0.1) г пробы, подготовленной к испытаниям в соответствии с разделом 3. в
центрифужную пробирку (см. 6.3.3). При ожидаемом содержании охратоксина более 0.005 млн 1массу
пробы уменьшают до 10 г; в противном случае следует принять во внимание возможный риск умень
шения извлечения охратоксина А из пробы.
Последовательно добавляют 30 см" раствора соляной кислоты (см. 6.2.1). 50 см3 раствора
хлористого магния (см. 6.2.2). перемешивают стеклянной палочкой и добавляют 100 см3толуола по
6.2.3 (V,).
Перемешивают в течение 60 мин и затем центрифугируют суспензию. Время центрифугиро
вания зависит от эффективности центрифуги. Центрифугирование проводят при охлаждении для
предотвращения потерь толуола. Отбирают аликвоту верхнего (толуольного) слоя объемом 50 см3
(Vr) и пропускают ее через колонку для твердофазной экстракции, подготовленную по 6.3.5, с подсое
диненным к ней резервуаром (см. 6.3.6).
П р и м е ч а н и е - Следует принять меры по недопущению перегрузки колонки.
Колонку промывают двумя порциями по 10 см3 гексана (см. 5.2.17) и затем двумя порциями
смешанного растворителя N? 2 (см. 6.2.8). Затем промывают 5 см3толуола, отбрасывая все элюаты.
Элюируют охратоксин А двумя порциями по 15 см3 смешанного растворителя Nt>3 (см. 6.2.9) в
остродонную колбу вместимостью 50 см3(см. 5.2.25). Объединенный элюат осторожно упаривают до
сухого остатка при пониженном давлении и температуре не выше 40 JC. Остаток растворяют в1
см3(У3) подвижной фазы (см. 6.2.10) и переносят в виалу (см. 6.3.9).
П р и м е ч а н и я
1 Условия элюирования охратоксина А и последующих операций могут зависеть от типа при
меняемых колонок для твердофазной экстракции. Например, следует проверить, соответствует ли
указанный выше объем элюента применяемому типу колонок.
2 Размеры и/или форма колбы могут оказывать негативное влияние на выход охратоксина А.
6.4.3 Условия хроматографического анализа
Если применяют колонку по 6.3.11.2 и подвижную фазу по 6.2.10, то хроматографический ана
лиз проводят в следующих условиях:
- скорость потока подвижной фазы...................1 см3/мин;
- длина волны возбуждения флуоресценции..........330 нм;
- длина волны регистрации флуоресценции
..........
460 нм;
- объем дозирования.................................................20 мм3.
6.4.4 Градуировка хроматографа
Градуировку хроматографа проводят при освоении методики и в дальнейшем во всех случаях,
когда изменяются условия хроматографического анализа.
Вводят в хроматограф по меньшей мере четыре градуировочных раствора с разными значе
ниями массовой концентрации охратоксина А (см. 6.2.16). Объем дозирования каждого градуировоч
ного раствора должен быть одним и тем же.
Устанавливают градуировочную характеристику как зависимость площади или высоты пика от
массы охратоксина А в инжектируемом объеме.
Проверяют линейность установленной градуировочной характеристики, используя коэффици
ент корреляции (см. 5.3.7). Ежедневно перед началом работы проводят контроль стабильности гра
дуировочной характеристики аналогично 5.3.8. используя при этом градуировочный раствор охраток
сина А массовой концентрации 25 мг/’см3(см. 6.2.16).
6.4.5 Идентификация охратоксина А
Пик охратоксина А идентифицируют путем сравнения значений времени удерживания пиков
на хроматограмме пробы и градуировочных растворов. В некоторых случаях может потребоваться
ввод пробы с добавкой раствора охратоксина А в подвижной фазе (см. 5.4.4).
13