ГОСТ 32587-2013
П р и м е ч а н и я
1 Причиной неудовлетворительного результата определения коэффициента прохождения
может быть повышенная скорость прохождения элюента через колонку.
2 Следует обратить особое внимание на необходимость определения коэффициента прохож
дения охратоксина А при смене партии силикагеля. Рекомендуется при переходе к новой партии си
ликагеля провести оптимизацию объемов элюентов. используемых при колоночной очистке проб
(см.5.4.3), добиваясь наибольшего значения коэффициента прохождения. Найденные при этом объе
мы используют при очистке проб на колонках, изготовленных из данной партии реагента.
3 Рекомендуется уточнить для конкретных матриц коэффициент прохождения охратоксина А с
использованием стандартных образцов состава продукции с аттестованным значением массовой до ли
охратоксина А либо путем анализа «чистой» пробы (охратоксин А в пробе не обнаруживается), в
которую внесена добавка охратоксина А. Анализируют стандартный образец (пробу с добавкой охра
токсина А) согласно 5.4.1 - 5.4.4. Вычисляют результат анализа (см. 5.5) и находят коэффициент про
хождения охратоксина А как отношение полученного результата к аттестованному значению массо вой
доли охратоксина А в стандартном образце или к массовой доле охратоксина А в добавке.
5.4 Проведение испытаний
5.4.1 Экстракция охратоксина А из пробы
Пробу измельченного продукта массой (5.00 ± 0.01) г помещают в плоскодонную колбу вме
стимостью 100 см3. Добавляют 30 см3хлороформа (см. 5.2.18) и 2,5 см3 раствора уксусной кислоты
(см. 5.3.2.2), интенсивно перемешивают 30 мин. Пропускают полученный экстракт через бумажный
складчатый фильтр «красная лента», отбирая 20 см"фильтрата для упаривания.
Если не удается отобрать 20 см3 фильтрата, то отбирают максимально возможный объем, из
меряют его и используют полученное значение в формуле (9).
Переносят полученный фильтрат в остродонную колбу вместимостью 50 см3и упаривают до
сухого остатка в вакууме при температуре водяной бани от 40 °С до 45 °С.
Сухой остаток обрабатывают по 5.4.2 или 5.4.3 в зависимости от цели испытания - скринин
гом проб или количественным определением массовой доли охратоксина А в пробе, в которой при
скрининге выявлен пик. идентифицированный как пик охратоксина А.
П р и м е ч а н и е- При испытаниях проб, для которых есть основание полагать, что они за
ражены охратоксином А. допускается сразу переходить к очистке на колонке по 5.4.3. минуя скрининг.
5.4.2 Проведение скрининга проб
Сухой остаток, полученный по 5.4.1, растворяют в 0.5 см3подвижной фазы no 5.3.2.1 и пере
мешивают 1 мин. Затем добавляют 3 см3гексана (см. 5.2.17) и снова интенсивно перемешивают. По сле
расслоения двух несмешивающихся между собой фаз аккуратно переносят приблизительно 0.3 см3
нижнего слоя в пробирку для микропроб однократного применения вместимостью 1.5 см3(пробир ка
типа Эппендорф) или аналогичную.
Регистрируют хроматограмму полученного раствора по 5.4.4 в день проведения испытаний.
Если на хроматограмме обнаруживают пик, идентифицируемый программным обеспечением к хрома
тографу как пик охратоксина А. то повторяют испытания пробы, включив в обязательном
порядке очистку по 5.4.3.
При отсутствии пика, идентифицируемого как пик охратоксина А. делают вывод об отсутствии
охратоксина А в пробе на уровне нижней границы диапазона измерений (0.0025 млн ’).
5.4.3 Очистка пробы и приготовление ее концентрата
Сухой остаток по 5.4.1 растворяют в 1см3 хлороформа.
Подготавливают стеклянную колонку по 5.3.4. Дают хлороформу стечь до уровня безводного
сернокислого натрия и наносят на колонку полученный раствор. Остродонную колбу, в которой про
водили упаривание экстракта, ополаскивают два раза по 1 см3хлороформа, который также наносят на
колонку. После этого промывают колонку 10 см3гексана, элюат отбрасывают.
Затем через колонку пропускают 30 см3 смеси хлороформа с муравьиной кислотой (см.
5.3.2.3) со скоростью не более чем одна капля в секунду, элюируя охратоксин А. Весь элюат собирают в
остродонную колбу и упаривают до сухого остатка в вакууме при температуре водяной бани от 40 СС до
45 °С.
Сухой остаток растворяют в 0,5 см3подвижной фазы (см. 5.3.2.1) и перемешивают 1 мин. За
тем добавляют 3 см3 гексана и снова интенсивно перемешивают. После расслоения двух несмеши
вающихся между собой фаз аккуратно переносят приблизительно 0,3 см3 нижнего слоя в пробирку
для микропроб однократного применения вместимостью 1.5 см3(пробирка типа Эппендорф) или
ана логичную. Полученный концентрат используют для хроматографических измерений по 5.4.4 в
день проведения испытаний.
8