ГОСТ 32368—2013
4.3 Тестовый раствор
4.3.1 Тестовые растворы требуемых концентраций готовят путем разбавления основного раство
ра. Основнойрастворподготавливаютпутемрастворения необходимыхвеществв водесиспользовани
ем механических средств (например, магнитные или ультразвуковые мешалки). Для получения
необходимого концентрированного раствора можно использовать таблицы растворимости. Использо
вание растворителей не рекомендуется. Однако при необходимости нужно отдельно поставить
контрольную пробус растворителем в тойже самой концентрации, что ив эксперименте. Выбор раство
рителя будет определяться химическими свойствами вещества. Рекомендуется максимальная кон
центрация растворителя 100 мкл/л. Рекомендуется минимизировать концентрацию растворителя
везде, где это технически выполнимо (в зависимости от физико-химических свойств исследуемого
вещества).
4.3.2 Может быть использован динамический (проточный) тип эксперимента. Такой тест требует
установки системы непрерывного распределения и разбавления основного раствора исследуемого
вещества (например, дозаторный насос, пропорциональный разбавитель, система растворения) для
обеспечения ряда концентраций в тестовых аквариумах. Объемные скорости потока основных раство
ров и разбавляющей воды следуетпроверятьрегулярно, предпочтительноежедневно, во время теста и
они недолжны менятьсяболеечем на 10% втечениетеста. Необходимососторожностью использовать
низкосортныепластиковыетрубки илидругие материалы, которыемогутсодержатьбиологическиактив
ные вещества. Выбирая материал для перекачивающей системы, необходимо учитывать возможную
адсорбцию исследуемого вещества наэтом материале.
4.4 Содержание подопытных рыб
4.4.1 Подопытныерыбыдолжны бытьотобраны излабораторий, предпочтительноизоднойлабо
ратории, и должныбытьакклиматизированы в течениепокрайнеймередвухнедельдотестапри услови
ях качества воды иосвещения, подобных используемым в тесте. Важно соблюдать норму заселения в
аквариумыдля каждого тестового вида рыб (приложения Dи G).
4.4.2 После 48-часового периода акклиматизации регистрируют смертность и следующие пара
метры:
- более чем 10 %смертностьвыборки черезсемьдней: исключаютиз эксперимента всю группу;
- смертность между 5 % и 10 % выборки: акклиматизация в течение семи дополнительных дней;
если более чем 5 % смертность в течениедополнительных семидней: исключают из эксперимента всю
группу;
- смертность меньше5 % выборки через семьдней, рыбыдопускаются ктесту.
4.4.3 Рыбы недолжны получатьлечение от болезнейвовремя периодаакклиматизации, в период
передэкспозициейили во время теста.
4.5 Предварительная экспозиция и выбор рыб
4.5.1 Впериодот однойдо двух недельдо контакта рекомендуется поместить рыб в емкости, ана
логичные тестовым. Рыбнеобходимохорошо кормитьв течениепериода акклиматизации иэкспозиции.
Период экспозиции начинают с отбора взрослых сексуально диморфных особей из лабораторной
поставки половозрелых животных (например, с выраженными вторичными половыми признаками,
заметными у толстоголового гольяна и японской медаки), пригодными для разведения. Для ориентира
(эти критерии не могут рассматриваться изолировано от фактически наблюдаемого репродуктивного
статуса конкретных рыб), толстоголовый гольян должен быть приблизительно 20 (±2)-недельного воз
раста. при условии, что рыбки выращивались при температуре25 (±2) вС втечение всей продолжитель
ности жизни. Японская медака должна быть приблизительно 16 (12) недель, содержащаяся при 25
(±2) °С в течении всейжизни. Данио рериодолжны бытьприблизительно 16(±2) недель при культива ции
при 26 (±2) °С. Производствояйцеклетокследуетоценивать ежедневнов течение предварительной
экспозиции. Рекомендуется, чтобы икрометание наблюдалось во всех репликациях до начала фазы
экспозиции. Рекомендации по значению количества ежедневно производящейся икры не могут быть
предоставлены на данном этапе, нодовольно часто наблюдается в среднем более 10 яйцеклеток/сам-
ка/деньдля каждоговида.
4.6 Процедура тестового метода
4.6.1 Используютдва раствора различных концентраций исследуемого вещества, один контроль
ный (вода)и.при необходимости, одинрастворс растворителем. Данные могут бытьпроанализированы
для определения статистически значимых различий между основными и контрольными растворами.
Эти анализы дают представление о долгосрочном воздействии теста на побочные эффекты(а именно,
4