ГОСТ 32368—2013
ческим исследованиям гонад после вскрытия брюшной полости ножницами. Обзор соответствующих
условийдля отбора биопроб приведен в приложении D.
Исследование начинают с отбора рыб, выбранных из поголовья, которое находится в состоянии
икрометания, старые животные недолжны использоваться. Исследование проводятс использованием
воздействия трех концентраций химического вещества плюс «чистый» контроль и контрольная проба с
растворителем, еслиэто необходимо. Используютдва параллельных испытания (каждый сосуд, содер
житпять самцовипятьсамок)для японскоймедакиили даниорерио. тогдакакдлятолстоголовогоголья
на используют четыре репликации (каждый сосуд содержит два самца и четыре самки). Этот принцип
учитывает территориальное поведение самцов толстоголового гольяна, сохраняя при этом достаточ
ную точность анализа.В ремя экспозиции составляет 21 день, отбор образцов также осуществляется на
21-йдень.
3.2.2На 21-й день все рыбы подвергаются эвтаназии. Вторичные половые признаки измеряют
на толстоголовом гольяне и японской медаке (приложения В и С): отбирают образцы крови для опре
деления вителлогенина у данио рерио и толстоголового гольяна, альтернативно голова/хвост может
быть отобраны для определения вителлогенина уданио рерио (приложение А): образцы печени, отби
раютсядля анализа VTG у японской медаки (приложение А); все гонады фиксируются по отдельности
для потенциальныхгистопатологическихоценок.
3.3 Критерии достоверности исследования
Для результатовтеста могут быть применены следующие условия:
- смертность в воде (или растворителе) недолжна превышать 10 % на моментокончания периода
воздействия;
- концентрация растворенного кислорода должна составлять по крайней мере. 60 % величины
воздушного насыщения в течение всего периода воздействия;
-температура воды не должна колебаться более чем на 11,5 °С между тестовыми сосудами в
любой момент проведения теста идолжна поддерживаться в пределахдиапазона в 2 °Сопределенном
для тестируемых видов (приложение D);
- полученные данные должны демонстрировать, что концентрация тестируемого вещества в
растворе поддерживается в пределах±20 % средневзвешенных значений,
- рыбыдолжны находиться в состоянииактивного нереста во всех взятыхдля оценки воздействия
химических вошествах и в контроле во время теста.
4 Описание метода
4.1 Оборудование
Стандартноелабораторное оборудование, в частности;
- кислородомеры и рН-метры;
- оборудованиедля определения жесткости и щелочности воды.
- надлежащий прибордля контроля температуры, предпочтительно, непрерывногодействия;
- емкости, выполненные из химически инертного материала и имеющие объем соответствующий
рекомендуемой загрузке иплотности заселения (приложение D);
- свежий субстратдля толстоголового гольяна и данио рерио (приложение Е);
- весы соответствующего класса точности (±0,5 мг).
4.2 Вода
Для эксперимента может быть использована любая вода, которая обеспечивает условия долго
временного выживания ирост тестовых видов. Онадолжна иметьпостоянныехарактеристикив течение
проведениятеста. Величина pH водыдолжнабыть вдиапазоне 6,5—8.5, ново времятеста это значение
должно колебаться в пределах±0,5. Чтобы гарантировать, что вода, используемаядля разбавления, не
будет влиять на результаты эксперимента (например, путем образования комплексов с тестируемым
веществом),должны быть взяты пробы водыдля анализа.
Необходимокаждые три месяца вразбавляющейводе измерятьконцентрацию тяжелыхметаллов
(Си. Pb, Zn. Hg, Cd, N и т. д.). основных анионов и катионов (Са. Mr. Na. К. Cl, S04и т. д.), пестицидов
(общеесодержание фосфора ихлорорганических веществ), содержание общего органического углеро
да исухойостатокдлятого, чтобыбытьуверенным в том,что водаявляетсяотносительно постоянной по
своему составу. Если существуют доказательства того, что качество воды постоянно в течение
года, определения могут быть менее частыми (например, каждые шесть месяцев). Некоторые
химические характеристики приемлемого разбавления водой перечислены в приложении F.
з