ГОСТ 32368—2013
Приложение О
(рекомендуемое)
Оценка вторичных половых признаков у толстоголового гольяна для обнаружения
некоторых веществ, активных по отношению к эндокринной системе
0.1 Краткий обзор
Потенциально важными признаками физического состояния у взрослых особей толстоголового гольяна при
проведении исследований эндокринных нарушений являются: цвет (светлыйТтемный), рисунок окраски
(присутствие ипи отсутствие вертикальных полос), форма тела (головной и грудной отделы, увеличение брюшка) и
специальные вторичные половые признаки (число и размер брачных бугорков, размер спинной подушки и
яйцеклада).
Брачные бугорки расположены на голове (спинная подушка) половозрелых самцов толстоголового гольяна
как правило билатеральной симметрично (Jenaen и др.. 2001). Самки и ювенильные особи обоих полов бугорков не
имеют (Jensen идр.. 2001). Самцы могут иметь до восьми бугорков вокруг глаз и возле ноздрей (Jensen идр.. 2001).
Самое большое количество и самые большие по размеру бугорки расположены в две параллельные линии ниже
ноздрей и выше рта. У многих рыб есть группы бугорков под нижней челюстью: возле рта в основном находятся
единичные пары, в товремя какбрюшко может насчитыватьдочетырех бугорков. Фактическое количество бугорков
редко превышает 30 (обычно. 18—28; Jensen и др.. 2001). Бугорки в основном имеют одинаковую форму, обычно
округлые, высотой, приблизительно равной радиусу. Большинство репродуктивно активных самцов могут иметь
сильно увеличенные бугорки, состоящие из нескольких слившихся в один.
Некоторые типы воздействующих на эндокринную систему химикатов могут вызвать аномапьное расположе-
ние вторичных половых признаков: например, антагонисты рецептора андрогена, такие как 17|1-метилтестостерон
или 178-тренболон, могут вызвать развитие брачных бугорков у женских особей гольяна (Smith. 1974. Ankley
и др.,2001:2003). в то время какантагонисты рецептора эстрогена могут привести куменьшению числа или размера
брачных бугорков усамцов (Mlles-Rlchardson идр.. 1999: Harries и др.. 2000).
Ниже дано описание исследования брачных бугорков у толстоголового гольяна, основанных на процедурах,
используемых а американской лаборатории Управления по охране окружающей среды (USEPA) в Дулуте (Минне
сота). Некоторые продукты и/или оборудование могут быть замещены на сопоставимые доступные материалы.
Исследования лучше всего проводить, используя лупус подсветкой или бинокулярный микроскоп с подсвет
кой (ЗХ). Рыба находится в дорсальном положении головой к исследователю
a) Расположите рыбув малой чашке Петри (например. 100 мм в диаметре)на боку хвостом вперед. Настрой
те видоискатель для идентификации бугорков. Осторожно и медленно переверните рыбу с одного бока на другой,
чтобы идентифицировать области бугорков. Посчитайте и классифицируйте бугорки.
b
) Повторите исследование на вентральной заднейповерхности теларыбы, повернув рыбу на спину хвостом
вперед в чашке Петри
c) Наблюдения должны быть проведены в течение 2 мин для каждой рыбы.
0.2 Подсчет и классификация бугорков
Шесть определенныхобластейдолжны бытьидентифицированы для оценки наличия бугорков и их развития
у взрослых особей толстоголового гольяна. Разработана таблица для картирования расположения и количества
бугорков (см. приложение А). Число бугорков регистрируется, и их размер количественно оценивается как.
с 0 — отсутствие. 1 — наличие. 2 — увеличенный и 3 — явно выраженный для каждого организма (рисунок D.1).
КлассО — отсутствие всех бугорков. Класс 1 — бугорки присутствуют, идентифицируются как бугорки, укото
рых одна вершина, а высота примерно равна ширине (диаметру). Класс 2 — увеличенные бугорки, ткань которых
внешне напоминает звездочку, обычно бопьшего диаметра и имеют канавки или борозды, появляющиеся из цен
тра. Высота бугорков часто более иррегулярна, может быть несколько скруглена. Класс 3 — бугорки выраженные,
обычно весьма крупные и округлые с менее выраженной структурой. Эти бугорки, иногда сливаются вместе и обра
зуют единую массу на протяжении одной или нескольких областей (В. С и О. см. ниже). Цвет и форма подобны клас
су 2. но часто менее выражены. Использование этой системы оценки дает общее количество бугорков менее 50. У
нормального самца в контроле количество бугорков 18—20 (Jensen и др.. 2001).
Некоторые рыбы могут иметь большее количество бугорков, т. к. матрица (см. приложение А) не включает
некоторые зоны. Если это произошло, следует сделать дополнительную оценку направо и налево от области под
счета. Матрица необязательно должна быть симметрично. Другая методика для картирования бугорков, которые
соединены попарно или вертикально вдоль линии рта. могла быть привести кдвойному учету бугорков, т.е. подсче
тудвух слившихся бугорков как один.
15