ГОСТ 32368—2013
практически необнаружим вплазме незрелыхсамок исамцоврыб, потомучтоони испытывают недоста
ток вэстрогене; однако их печень способна к синтезу и выделению VTG в ответ на экзогенную стимуля
цию эстрогена.
3.1.4 Измерение VTG используют для обнаружения веществ с различными антиэстрогенными
свойствами. Обнаружение антиэстрогенных химических веществ возможно через измерение индукции
VTGy самцов рыб. Индукция VTG была также продемонстрирована после экспонирования ароматизи
рованнымиандрогенами. Снижениеуровняциркулирующихэстрогеновусамокв результате, например,
ингибирования ароматазы-фермента. который превращает андрогены в эндогенные эстрогены в
естественных условиях (17^эстрадиол), приводит к снижению уровня VTG. используемого для обнару
жения ингибиторов ароматазы. Биологическая значимость реакции VTG в ответ на ингибирование
эстрогенаУароматазы установлена и хорошо изучена. Однако производство VTG у самок также может
быть изменено общей токсичностью и токсическим действием веществ не обладающих эндокринной
токсичностью (например, гепатотоксичность).
3.1.5 Несколько методов измерения были успешно разработаны и стандартизированы для
повседневного использования. Это касается конкретных видов иммуноферментного анализа (ИФА),
использующихся в иммунохимии для количественного определения VTG. синтезированного в малых
образцах крови или печени, собранныхот отдельных особей рыб. Образцы для измерения VTG отбира
ют у трех видов: толстоголового гольяна (кровь), данио рерио (кровь или гомогенат головы/хвоста) и
медаки японской (печень). У японской модаки наблюдается высокая корреляция между концентрацией
VTG, измеренной в крови и печени. В приложенииА приведены рекомендуемые процедуры отбора проб
для анализа VTG. Оборудованиедля измерения вителлогенинадоступно, такие установкидолжны быть
основаны на проверке видоспецифическим методом ИФА.
3.1.6 Вторичные половые признаки у самцов рыб отдельных видов являются вполне различимы
ми. определяются количественно иреагируютна уровни циркулирующихэндогенных андрогенов, в слу
чае толстоголового гольяна и японской медаки. но не для данио рерио, не обладающего вторичными
половыми признаками, которые возможно измерить количественно. Самки обнаруживают способность
формировать мужские вторичные половые признаки, когда они подвергаются действию андрогенных
веществв воде. Уменьшение вторичныхполовых признаковусамцов следуетинтерпретировать состо
рожностью из-за низкойстатистическойдостоверностиидолжно бытьподтвержденоэкспертнымиоцен
ками и убедительными доказательствами. Существуют ограничения в использовании данио рерио в
этом пробитанализе, в связис отсутствием измеримых вторичных половых признаков,
чувствительных к действию андрогенотоксичных веществ.
3.1.7 У толстоголового гольяна главным индикатором воздействия экзогенного андрогена явля
ется количествобрачныхбугорков, расположенных на переднейчасти головы самки. Уяпонской медаки
главным маркером экзогенного воздействия андрогенов является количество папиллярных бугорков у
самок рыб. В приложении Виприложении Сприведены рекомендуемые процедуры, которым необходи
мо следовать для оценки половых характеристик толстоголового гольяна и японской медаки, соот
ветственно.
3.1.8 21-дневная методикаанализа рыб включает количественную оценкупроизводства яйцекле
ток и сохранение гонад для дополнительной экспертизы гистопатологии. Некоторые регулирующие
органы могут потребоватьналичияданного показателядля более полной оценки репродуктивной функ
цииподопытныхживотныхили вслучаях, когдавителлогенин ивторичныеполовыепризнакинереагиру
ют на воздействие химических веществ. Некоторые показатели легко диагностируемы (например,
индукция вителлогенина у самцов и образование бугорка у самок), не все данные анализа (например,
плодовитость и гистопатология гонад) способны однозначно определить конкретные клеточные меха
низмы действия. Совокупность полученных результатов позволяет сделать выводы в отношении
возможных нарушений эндокринной системы и тем самым служитруководством длядальнейших испы
таний. Хотя этот параметр не относится к эндокринному и к общей плодовитости из-за демонстрации
чувствительности на воздействие известныхэцдокринно-активных веществ, он является важным пока
зателем. так какотсутствие данных реакций, а такжедругих реакций увеличивает вероятность того, что
соединение не имеет эндокринной активности.
3.2Принцип теста
3.2.1В пробит-анализе самцы и самки рыб репродуктивного возраста совместно подвергаются
воздействию в тестовыхсосудах. Состояние нерестапозволяетдифференцировать каждый поли таким
образом связать результаты с анализом каждой конечной точки, а также гарантирует их чувствитель
ностьк экзогенным химическим веществам. По завершении теста животные подвергаются макроскопи-
2