ГОСТ 32368—2013
Рисунок F.8
Заключительная процедура.
F.4 Процедура 2 В: японская медака (Oryzlaslatlpes). предварительная подготовка печени для анали
за вителлогенина
Берут флакон, содержащий гомогенатный буфер из набора ELISA и охлаждают его с измельченным льдом
{температура раствора: не более 4 X ). Если используется гомогенатный буфер из набора ЕпвюЕНвА. оставляют
оттаять раствор при комнатной температуре, затем охлаждают флакон с измельченным льдом.
Рассчитывают, обьем гомогенатного буфера для печени исходя изее веса (используют50 мкл буфера на 1мг
веса печени для гомогенирования). Например,если веспечени4.5 мг. объем буфера составит 225 мкл. Подготавли
ваютсписок необходимых объемов буфера для всех образцов печени.
F.4.1 Подготовка печени для предварительной обработки
F.4.1.1 Берут микропробиркуна 1.5 мл.содержащую печень из морозильника перед предварительной обра
боткой.
F.4.1.2 Предварительная обработка печени самцов должна быть выполнена раньше самок, чтобы предо
твратить загрязнение вителлогенином. Кроме того, предварительная обработка для тестируемых групп должна
быть проведена в такой последовательности, контроль, контроль растворителя (если применимо), самая низкая
концентрация, средняя концентрация, самая высокая концентрация и положительный контроль.
F.4.1.3 Количество микропробирок на 1.5 мл. содержащих образцы печени, взятые из морозильника не
должно превысить количество, которое можно центрифугировать.
F.4.1.4 Устанавливают микропробиркина 1.5 мл. содержащие образцы печени в емкостисольдом в последо
вательности проведения анализа (размораживание печени неважно).
F.4.2 Проведение предварительной обработки
F.4.2.1 Добавляют гомогенатный буферный раствор
Проверяютсписокобъемов гомогенатногобуфера, которые будутиспользованы для каждогообразца печени
и выставляют микропипетку (диапазон объемов: 100—1000 мкл) на соответствующий объем. Присоединяют
чистый наконечник к микропипетке.
Берут гомогенатный буфер из флакона идобавляют буфер а микропробирку на 1.5 мл. содержащую печень.
Добавляют гомогенатный буфер ко всем микропробиркам на 1.5 мл, содержащим печень, согласно процеду
ре. описанной выше. Нет никакой потребности менять наконечник микропипетки на новый. Однако, если ее конец
загрязнен, наконечник необходимо заменить.
F.4.2.2 Гомогенизация печени
1 Присоединяют новый пилон для гомогенизации к гомогенизатору микропробирки.
2 Вставляют пилон в микропробирку на 1,5 мл.
Устанавливают гомогенизатор для раздавливания печени между поверхностью пилона и внутренней
стенкой микропробирки на 1.5 мл.
3 Включают гомогенизатор на 10—20 секунд. Охлаждают микропробирку измельченным льдом во время
операции.
25