ГОСТ 32368—2013
Приложение Е
(рекомендуемое)
Оценка вторичных половых признаков у японской медаки для обнаружения
определенных веществ, воздействующих на эндокринную систему
Ниже дано описание измерения папиллярных бугорков, которые являются вторичными половыми признака
ми медаки (Oryziaaletipos).
Папиллярные бугорки обычно появляются только у взрослых самцов и расположены между вторым и седь
мым или восьмым лучом анального плавника (рисунки Е.1 и Е.2). Очень редко они могут появляться на первом луче
плавника. Это стандартная процедура (СП) позволяет измерять бугорки на первом луче плавника (число
лучей считается от в этой СП от хвоста).
1 Послеиссечения печени (приложение F)тушкупомещают в коническую тубу.содержащую приблизительно
10 мл 10 %-ного нейтрального буферизованного водного раствора формальдегида (верх головы, низ хвоста).
Если гонада фиксирована в другом растворе, кроме 10 %-ного нейтрального буферизованного водного
раствора формальдегида, леоают с помощью бритвы поперечный разрез через тушку между областью
анального ребра и задним проходом, стараясь не задеть гонопоры и гонады (рисунок Е.З). Размещают
головную часть тела рыбы в фиксирующем растворе для сохранения гонады и хвостовую часть тела рыбы а
10 %-ном нейтральном буфе ризованном водном растворе формальдегида, какописано выше.
2 После размещения тела рыбы в 10 %-ном нейтральном буферизованном водном растворе формальдеги
да, берут область позади анального плавника пинцетом и сгибают ее приблизительно на 30 с. чтобы открыть
анальный плавник. Взяв анальный плавникпинцетом, осторожно берут несколько лучей плавника, чтобы не повре
дить папиллярные бугорки.
3 Подержав анальный плавникоткрытым приблизительно 30 с. сохраняют тело рыбы в 10%-ном буферизо
ванном растворе формальдегида при комнатной температуре до измерения папиллярных бугорков (измерение
должно быть проведено по истечении по крайней мере 24 ч).
Измерение
1 После фиксации тела рыбы в 10 %-ном растворе формальдегида в течение по крайней мере 24 ч, вынима
ют тушку рыбы из конической тубы и удаляют формальдегид на фильтровальной бумаге (или бумажном поло
тенце).
2 Помещают рыбу на брюшко. Затем аккуратно удаляют анальный плавник, используя малые ножницы рас
сечения (предпочтительноудаляют анальный плавник с небольшим количеством эндоскелета).
3 Берут заднюю частьотделенного анального плавника пинцетом и помещают его на стеклянную пластину с
несколькими каплями воды. Затем покрывают анальное ребро покровным стеклом. Стараются не рассечь папил
лярные бугорки во время захватывания анального плавника пинцетом.
4 Подсчитывают количество слившихся папиллярных бугорков, используя счетчик для биологического
микроскопа (микроскоп прямого света или инвертированный микроскоп). Папиллярные бугорки учитывают когда
формации бугорков заметны на задней части пластинки. Регистрируют в рабочем журнале количество слившихся
папиллярных бугорков в каждом луче плавника (например, первый луч: 0. второй луч. 10. третий луч: 12 и т. д.).
и затем рассчитываютсуммус помощью таблицы Excel для каждой рыбы. Вслучае необходимости,делают фотогра
фию анального плавника иподсчитывают число слившихся папиллярных бугорков на фотографии.
5 После измерения помещают анальный плавник в коническую тубу, описанную в 1для хранения.
А — самец: В —самка (Ока. Т В., 1931 Ortthe processes onInefinraysof the maleofOryziostalipesand other sexcharactersof this
fish.J. Fac. Set.. TokyoUniv. IV.2.209 - 216)
Рисунок E.1 — Схема, иллюстрирующая различие в форме и размере анального плавника в зависимости от пола
18