ГОСТ 32368—2013
должны изменяться более чем на 10 % в течение теста. Рекомендуется измерять фактические кон
центрации вещества во всех сосудах в начале теста ив еженедельных интервалах после этого.
5.3.2 Рекомендуется обосновывать результаты на измеренных концентрациях. Если концентра
ция тестового вещества в растворе была удовлетворительно поддержана в пределах i20 % от номи
нальной концентрации в течение всего теста, то результаты могут быть привязаны или к номинальной
концентрации, или измеренным значениям.
5.3.3 При необходимостиобразцыдолжны бытьотфильтрованы (например, спомощьюфильтрас
размерами пор 0.45 мкм) или отцентрифугированы. Центрифугирование является предпочтительным.
Если тестируемое вещество не адсорбирует нафильтры, фильтрация приемлема.
5.3.4 Во времятестарастворенныйкислород, температураи pH средыдолжны измерятьсявовсех
тестовыхсосудах по крайней мере раз в неделю. Общаяжесткость и щелочностьдолжны измеряться в
одном сосуде с самой высокой концентрацией по крайней мере раз в неделю. Температурадолжна про
веряться непрерывно по крайней мере в одном тестовом сосуде.
5.4 Наблюдения
Ряд общих биологических реакций(выживание. например) и целевых тестов(уровни вителлогени-
на, например) оцениваютв ходеили поокончании теста. Количественный контрольплодовитости можно
при необходимостипроводитьежедневно. Измерения иоценкиэтихбиомаркеров иих полезностьописа
ны далее в настоящем стандарте.
5.4.1 Выживание
Рыбы должны обследоваться ежедневно во время тестового периода, исмертность в этот период
должна регистрироваться. Мертвые рыбыдолжны быть удалены как можно скорее. Заменять мертвых
рыб в контроле или в тестовых сосудах нельзя. Пол рыб. которые гибнут во время теста, должен быть
определен макроскопической оценкой гонад.
5.4.2 Поведение и внешний вид
5.4.2.1 Любоеотклонение вповедении (относительноконтроля) должно бытьотмечено; это может
быть проявлением общей токсичности, включая гипервентиляцию, нескоординированное плавание,
потерю равновесия, неподвижностьили атипичное кормление. Следуеттакжеотмечатьлюбыевнешние
аномалии (например, кровотечение, изменениецвета). Следуетпроявлятьосторожностьпри интерпре
тации этих признаков токсичности, так как они не являются надежными свидетельствами
биомаркеров о потенциальном воздействии на эндокринную систему. Эти наблюдения могут также
предоставить качественную информацию, полезнуюдля планирования будущихэкспериментов на
рыбах, например, территориальную агрессивность самцов или маскулинизацию самок у
толстоголового гольяна под воздействием андрогенов. Характерное поведение данио рерио
выметывать икру с первыми лучами солнца может меняться подвоздействием эстрогенов
илиантиаидрогенов.
5.4.2.2 Наблюдения за качественными изменениями в поведении рыб важны также и при отборе
экспериментальных животных. Некоторые активные для эндокринной системы вещества могут немед
ленно повлиять на следующие особенности поведения толстоголового гольяна: окраска (осветление
или потемнение), равномерностьокраски (наличиевертикальныхполос)иформатела (врайоне головы
игруди). Поэтомунаблюдения зафизическим появлением рыбследуетпроводитьвтечениевсеготеста,
вплотьдо его завершения.
5.4.3 Плодовитость
Ежедневные количественные наблюдения нереста должны быть записаны в рабочий журнал.
Образование яйцеклеток должно учитываться как количество яйцеклеток/количество выживших
самок/день. Яйцеклетки удаляются из испытательных камер ежедневно. Поверхность для нереста
должнабытьпомещена в испытательную камерудля видовтолстоголовогогольянаи данио рериочтобы
испытуемые рыбы шли на нерест в нормальных условиях. Приложение Едаетболее подробную инфор
мацию о рекомендуемых нерестовых субстратах для видов данио рерио и толстоголовый гольян.
Обеспечение вида японскаямедака субстратомдля нереста не считается необходимым.
5.4.4 Эвтаназия рыбы
В 21-й день, то есть в завершении экспозиции, рыбы должны быть подвергнуты эвтаназии с
помощью раствора трикаина (трикаина метансульфонат. Metacain. MS 222 (CAS 886-86-2) в концентра
ции 100—500 мг/л. буферизованныхс 300 мг/л NaHCOj (CAS 144-55-8). предназначенногодля снижения
раздражения слизистой оболочки: кровь итканьсобираютдля определения вителлогенина.
5.4.5 Наблюдение вторичных половых признаков
Некоторые эндокринные нарушения могут влиять на вторичные половые признаки (количество
брачных бугорков у самцов толстоголового гольяна, папиллярные бугорки у самцов японской медаки).
Некоторые вещества могут также вызывать аномальные проявления вторичных половых признаков
6