ГОСТ 32031-2012
Аналогичным образом проводят пересев и на вторую плотную селективную среду (см. 6.4.2
или 6.4.3, или 6.4.4).
10.4.2 С посевным материалом, выращенным на среде обогащения (см. 10.3.2), повторяют
процедуру приведенную в 10.4.1.
10.4.3 Чашки с посевами на первой плотной селективной среде (см. 10.4.1 и 10.4.2) культиви
руют вверх дном в термостате при температуре (37
±
1) 3С в течение 24 - 48 ч.
Чашки с посевами на второй плотной селективной среде инкубируют согласно инструкции
производителя питательных сред.
10.4.4 Через (24 ♦ 3) ч или (48
±
2) ч [если после (24
±
3) ч отмечен слабый рост культуры или
его отсутствие] культивирования на первой и второй плотной селективной средах (10.4) учитывают
наличие колоний с ростом характерных для бактерий рода Listeria и Listeria monocytogenes.
10.4.4.1 На первой селективной плотной среде бактерии вида L. monocytogenes и L. ivanovii
растут в виде сине-зеленых колоний, окруженные непрозрачным ореолом (типичные колонии). Другие
виды бактерий рода Listeria также растут в виде сине-зеленых колоний, без ореола.
П р и м е ч а н и я
1 Некоторые штаммы L. monocytogenes могут давать очень слабый ореол вокруг колонии или
вовсе не иметь его. Это характерно для «поврежденных» клеток L. monocytogenes (например, вслед
ствие воздействия кислот).
2 Некоторые штаммы L. monocytogenes характеризуются пониженной фосфатидилинозитол-
фосфолипазной С активностью. Для выявления таких штаммов требуется более продолжительное
культивирование.
10.4.4.2 Посевы на второй плотной селективной среде просматривают на наличие колоний с
ростом характерным для бактерий рода Listeria.
На Палкам агаре все виды бактерий рода Listeria формируют мелкие серовато-зеленые или
оливково-зеленые колонии с черным ореолом, иногда с черным центром.
На Оксфорд агаре все виды бактерий рода Listeria формируют мелкие сероватые колонии, ок
руженные черным ореолом.
На ПА
Л
все виды бактерий рода Listeria формируют мелкие серовато-желтые колонии с чер
ным ореолом.
10.4.4.3 При отсутствии роста характерных колоний бактерий рода Listeria и Listeria monocyto
genes на первой и второй плотных селективных средах исследования прекращают и делают заклю
чение об отсутствии в исследуемой пробе продукта бактерий Listeria monocytogenes.
10.5 Идентификация выделенных культур до рода Listeria
10.5.1 Выбор колоний для подтверждения
10.5.1.1 С каждой чашки с плотной селективной средой (см. 10.4.4.1 и 10.4.4.2) отбирают по
пять колоний с ростом, характерным для бактерий рода Listeria и Listeria monocytogenes.
Если на чашке выросло менее пяти типичных колоний, отбирают их все.
10.5.1.2 Отобранные колонии пересевают на поверхность подсушенного триптон-соевого ага
ра с дрожжевым экстрактом (см. 6.5.1.1) или другого плотного питательного агара (см. 6.5.1.2 -
6.5.1.3) так. чтобы получить изолированные колонии.
Посевы культивируют при температуре (37
±
1) °С в течение (24
±
3) ч до появления видимого
роста.
На триптои-соевом агаре с дрожжевым экстрактом бактерии рода Listeria растут в виде выпук
лых. бесцветных и непрозрачных колоний в диаметре от 1,0 до 2.0 мм.
Для подтверждения принадлежности выделенной культуры к бактериям рода Listeria проводят
следующие тесты.
10.5.2 Реакция на каталазу
Берут изолированную колонию, выделенную по 10.5.1.2. и вносят в каплю 3 %-ного раствора
перекиси водорода (см. 6.6.1). Мгновенное образование пузырьков газа указывает на положительную
реакцию.
Бактерии рода Listeria являются каталазоположительными.
5