ГОСТ 32031-2012
Б.5.1.3 Дефибринированная кровь барана
Приготовление:
В стерильную колбу со стеклянными бусами вливают 8 см3только что взятой крови барана и
непрерывно встряхивают в течение 10-15 мин, в результате чего находящийся в крови фибрин вы
падает в осадок, обволакивая бусы. Дефибринированную кровь сливают в другую колбу или пробир ку.
Слитая дефибринированная кровь утрачивает способность свертываться и может храниться при
температуре (4 ♦ 1) °С в течение одной недели.
Б.5.1.4 Готовая среда
Состав среды:
основа среды (см. Б.5.1 или Б.5.2)100 см3
дефибринированная кровь барана5.0-7.0 см3
Приготовление:
В основу среды (см. Б.5.1 или Б.5.2). охлажденную на водяной бане до температуры (47
±
2)
°С. добавляют дефибринированную кровь барана (см. Б.5.1.3). Среда должна иметь pH (7.2
±
0.2) ед.
pH.
Готовую среду осторожно перемешивают и разливают в чашки Петри (не более 10 см” на
чашку) и после затвердения агара подсушивают его при температуре (47
±
2) °С в течение 30 мин или
в ламинарном боксе в течение 1-2 ч или в других условиях, обеспечивающих испарение конденсаци
онной влаги и исключающих микробное загрязнение.
Среду в чашках хранят при температуре (4
±
1) °С не более двух суток.
В зависимости от плотности среды.
Слой агара в чашке Петри должен быть равномерно окрашен в красный цвет. Для посева
должна использоваться подсушенная среда.
Б.6 Суспензия из эритроцитов барана для определения гемолитической активности
Приготовление:
Кровь из яремной вены барана отбирают в стерильную банку с бусами и дефибринируют (см.
Б.5.1.3). Эритроциты трижды отмывают изотоническим раствором хлорида натрия путем центрифуги
рования при 1000—2000 об/мин в течение 5—10 мин соответственно. После последнего центрифуги
рования надосадочная жидкость должна быть прозрачной. Красный цвет жидкости (гемолиз) свиде
тельствует о непригодности эритроцитов к применению. Отмытые эритроциты барана необходимо
хранить при температуре (3
±
2) °С не более двух суток.
Если гемолиз эритроцитов барана не наблюдается, необходимо внести 2 см3кровяных телец
в 98 см3 фосфатно-солевого буфера (PBS) (см. Б.11).
Если гемолиз эритроцитов наблюдается, необходимо внести около 4 см3слоя кровяных те
лец в 10 см3фосфатно-солевого буфера (PBS) (см. Б.11) и осторожно перемешать, а затем центри
фугировать. Если жидкость на поверхности стала четко красного цвета благодаря выраженному ге
молизу. не допускается использование такой суспензии эритроцитов, она должна утилизироваться.
Суспензию эритроцитов барана необходимо хранить при температуре (3
±
2) °С не более пя
ти суток.
Б.7 Среды для определения ферментативных свойств
Б.7.1 Бульон с бромкрезоловым пурпурным
Б.7.1.1 Основа среды
Состав:
протеозный пептон10,0 г
мясной экстракт1,0 г
хлорид натрия5.0 г
бромкрезоловый пурпурный0,02 г
дистиллированная вода1000.0 см3
Приготовление:
Компоненты или сухую готовую среду растворяют в дистиллированной воде.
Устанавливают pH среды таким образом, чтобы после стерилизации его значение составляло
(6.8
±
0,2) ед. pH. Разливают среду в пробирки соответствующего объема и стерилизуют в автоклаве
при температуре 121 °С в течение 15 мин.
Б.7.1.2 Растворы углеводов
Состав:
углевод’5,0 г
22