ГОСТ Р МЭК 61189-2—2012
- гептагидрат сульфата цинка (ZnS047H20) 0.002 г;
- моногидрат сульфата марганца (MnS04H20) 0.001 г,
- хлорид бензалкония:
- дистиллированная вода 1 000 мл.
Ь)Стерилизовать растворы минеральных солей в автоклаве при температуре 121 еС в течение
20 мин. Отрегулировать кислотность раствора, добавив 0.01 нормального раствора NaOH так. чтобы
после стерилизации показатель кислотности был в пределах от 6.0 до 6.5. Подготовить достаточное
количество раствора солей для проведения требуемых испытаний.
10.18.4.2 Чистота реагентов
Во всех испытаниях должны использоваться химически чистые реагенты. Если другие требования
не определены, предполагается, что все реагенты должны соответствовать техническим условиям со
ответствующего Национального органа, который определяет химические реагенты.
10.18.4.3 Чистота воды
Если другие требования не определены, под водой понимают дистиллированную воду или воду
такой же степени чистоты.
10.18.4.4 Подготовка смешанной взвеси спор
a) Должны использоваться следующие виды испытательных грибов.
Примечание — Виды грибов определены номерами АТСС (Американская коллекция типовых культур).
См. п) Источники микроорганизмов:
-Aspergillus niger:
l
- Chaetomium globosum;
- Gliodadium virans;
-Aureobasidium pullulans;
- Penicillium funiculosum.
b) Хранить грибковые культуры отдельно в соответствующей среде, такой как картофельный агар
с декстрозой. Однако культура chaetomium globosum должна выращиваться на полосах фильтроваль
ной бумаги на поверхности агара минеральных солей. (Агар минеральных солей идентичен раствору
минеральных солей, но. кроме того, содержит 15,0 г агара на литр.)
c) Исходные культуры могут храниться не более 4 мес при температуре (6
±
4) °С, в течение этого
времени должны быть созданы субкультуры, новые исходные (чистые) культуры должны быть отобра ны
из субкультур.
d) Если происходят генетические или физиологические изменения, необходимо получить новые
культуры, как описано выше. Субкультуры, используемые для подготовки новых исходных культур или
взвесей спор, должны быть выведены при температуре (30
±
1)°С в течение от 9до 12 дней или дольше.
в) Подготовить взвеси спор из каждого из этих пяти видов грибов, наливая в одну субкультуру
каждого гриба 10 мл стерильного раствора, содержащего 0.05 г нетоксичного увлажняющего агента на
литр, такого как сульфосокцинат диоктила натрия или сульфат лаурила натрия.
0 Использовать стерильную платиновую или нихромовую затравочную проволоку, чтобы осторож
но очистить поверхность от выросшей культуры испытательного организма.
д) Вылить взвесь спор в стерильную 125-миллиметровую стеклянную колбу Эрленмейера. содер
жащую 45 мл стерилизованной воды и от 50 до 75 твердых стеклянных бус диаметром 5 мм.
h) Интенсивно взболтать колбу, чтобы освободить споры от слорганий и разбить скопления спор.
i) Отфильтровать диспергированную взвесь грибковых спор через 6-миллиметровый слой стекло
ваты. содержащейся в стеклянной трубке, в стерильную колбу.
j) С помощью этого процесса должны быть удалены все большие фрагменты мицелия и скопления
агара, которые могут помешать процессу распыления.
k) Центрифугировать отфильтрованную взвесь спор в стерильных условиях и избавиться от
всплывающей жидкости.
) Повторно растворить осадок в 50 мл стерилизованной воды и центрифугировать. Промыть спо
ры. полученные из каждого гриба, таким же образом три раза.
т )Разбавить окончательно отмытый осадок в стерилизованном растворе минеральных солей до
концентрации (1 000 000
±
200 000) спор на мл. что определяется в счетной камере.
п) Повторить эту процедуру для каждого организма, используемого в испытании, и смешать рав
ные объемы получившейся взвеси спор, чтобы получить конечную смешанную взвесь спор. Свежая
84