ГОСТ 31928—2013
6.1.11 Приготовление реактивов для окраски по Граму {модификация Г.П. Калины) — по
ГОСТ 9225 и ГОСТ 10444.1.
6.1.12 Приготовление раствора хлористого натрия — по ГОСТ 9225.
6.1.13 Приготовление щелочного раствора сорбиновой кислоты
1 г сорбиновой кислоты переносят, смывая раствором гидроокиси натрия (NaOH) концентрацией
1моль/дм3,в мерную колбу вместимостью 100 см3,доводят объемдо метки тем же раствором. Получен
ный растворстерилизуют методом мембранной фильтрации по ГОСТ 26670. Допускается готовить рас
твор сорбиновой кислоты без фильтрации, с соблюдением правил асептики, при этом раствор
гидроокиси натрия готовят настерильнойдистиллированной воде.
6.1.14 Реактивдля определения цитохромов готовят по ГОСТ 10444.11.
6.2 Приготовление питательных среддля культивирования бактерий рода Lactobacillus
6.2.1 Приготовление жидкой и плотной среды Бликфельдта
Жидкую и плотную среду Бликфельдта готовятсогласно ГОСТ 10444.1 или ГОСТ 10444.11.
6.2.2 Агаризованные среды изтоматного сока готовятпо ГОСТ 10444.1.
6.2.3 Среды МРС готовят по ГОСТ 10444.11.
6.2.3.1 Среда МРСжидкая
В мерную колбу вместимостью 1,0дм3помещают 10 гпептона, 20 см3дрожжевого экстракта, 20,0 г
глюкозы. 1.0 см3твина-80.2,0 г калияфосфорнокислогодвузамещенного, 5.0 гнатрияацетата, 2.0 г три-
аммония цитрата, 0.2 г сульфата магния. 0.05 гсульфата марганца (MnS04•4Н20), доливаютдо метки
мяснуюводу; растворяюткомпонентынагреваниемнаводянойбане иустанавливаютpH такимобразом,
чтобы после стерилизации он составлял при температуре25 °С {6,2
±
0,1).
Среду разливают по 10 см3 в стерильные пробирки и стерилизуют в автоклаве при температуре
(121
1
1)°С в течение 15мин.
Пробирки с питательной средой хранят при температуре (4
±
1) °С неболее 30 сут.
6.2.3.2 Среда МРС агаризованная
Готовят, каксредуМРС жидкую, сдобавлением 15—18 гагар-агара. После растворения компонен
тов среду разливаютв стерильные колбыистерилизуютв автоклаве при температуре(121
1
1)°Свтече
ние 15 мин. Готовую среду хранят при температуре (4 i 1) °С не более 30 сут.
При необходимости, для повышения селективности, после стерилизации к 1дм3агаризованной
или жидкой средыдобавляют 1см3 щелочного раствора сорбиновой кислоты.
6.2.4 Капустный агар готовят по ГОСТ 10441.1.
6.2.5 Среды Рогоза готовят по ГОСТ 10444.11.
6.2.5.1 Среда Рогоза жидкая
В мерную колбу вместимостью 1,0 дм3помещают 10.0 г пептона, 25.0 см3дрожжевого экстракта,
20.0 г глюкозы, 1,0 см3твина-80.6,0 г калия фосфорнокислого однозамещенного. 2,0 г цитрата аммония,
25.0 г ацетата натрия, 1,32см3ледяной уксусной кислоты. 0.575 гсульфата магния. 0.12 гсульфата мар
ганца (MnS04• 2Н20). 0,034 г сульфата железа. Затем в колбу доливают до метки дистиллированную
воду, растворяют компоненты нагреванием на водяной бане и устанавливают pH таким образом, чтобы
после стерилизации он составлял при температуре 25 °С (5.4
±
0.1). Среду разливают по 10 см3в сте
рильные пробирки и стерилизуют в автоклаве при температуре (121 ♦1) °С в течение 15мин.
Пробирки с питательной средой хранят при температуре (4
±
1) °С неболее 30 сут.
6 2.5.2 Среда Рогоза агаризованная
Среду Рогоза агаризованную готовят как среду Рогоза жидкую, сдобавлением 20,0 г агара. После
растворения компонентов среду разливают в стерильные колбы и стерилизуют в автоклаве при темпе
ратуре (121
±
1) °Св течение 15мин.
Срок хранения готовой среды при температуре (4
±
. 1)°С — не более 30 сут.
6.2.6 Гидролизованное молоко готовят по ГОСТ 10444.11.
Натуральное или восстановленное обезжиренное молоко кипятят или обрабатывают текучим
паром в течение 30 мин и охлаждают при температуре (45
±
2) °С. Доводят pH до (7.7
±
0.1), добавляя
водный раствор NaOH с массовойдолей 40 %. К 1000см3молокадобавляютот 0.5до 1.0 г порошка пан
креатина. Затем к молоку добавляют от 5 до 6 см3хлороформа. Колбу закрывают и выдерживают при
температуре (40
±
2) °Свтечение 18—24ч. Втечениепервых3—5 чмолокодва-трираза перемешивают
(пробку после перемешивания приоткрываютдля удаленияхлороформа).
Затем гидролизованное молокофильтруютчерезбумажный фильтр, разводятдистиллированной
водой в соотношении 1:1, устанавливают pH (7.1 i0,1), добавляя водный раствор NaOH с массовой
долей 40 %, ииспользуютдля приготовленияагара с гидролизованным молоком.
4