ГОСТ 31928—2013
- чашки Петри помещаютванаэростат, аппаратзакрывают, спомощью вакуумногонасосасоздают
вакуум 86,6—93,3 кПа:
- в каждую пробирку с жидкой средойдобавляют стерильный жидкий парафин в количестве, необ
ходимомдля получения столба высотой около 2 см.
Чашки следуетанализировать непосредственно послетермостатирования. В другихслучаях, кро
ме особооговоренных, их хранят не более 24 ч в холодильнике.
8.2 Глубинный метод посева в плотные среды
8.2.1 Жидкий препарат или разведение навески вносят параллельно вдве чашки Петри и залива
ютне позднеечем через 15 мин расплавленной иохлажденнойдо температуры (45 i 1)°С питательной
средой. Высота слоя питательной средыдолжна быть4—5 мм.
8.2.2 Среду немедленно равномерно перемешивают с посевным материалом круговыми движе
ниями чашки так. чтобы среда не вытекала из чашки и не загрязняла крышку. После застывания среды
чашки спосевами вверхдном помещают в термостат.
8.3 Глубинный метод посева в полужидкие питательные среды
8.3.1 Готовят два рядапробирок, содержащихполужидкуюпитательнуюсреду(по 10см3в пробир
ке)для высева в них соответствующихразведений исследуемого препарата. Внесение посевного мате
риала впитательную средуначинаютс последнегоразведения, внося впоследнюю пробиркукаждого из
двух рядовпитательной среды по 1см3последнегоразведения препарата, затем таким жеобразом вно
сят по 1 см3предыдущихразведений. При внесении разведенийв питательнуюсредупроводяттщатель
ное перемешивание пипеткой, а затем круговыми движениями руки или с помощью шуттель-аппарата.
Для каждого посева берут новую стерильную пипетку.
9 Методы идентификации пробиотических микроорганизмов
9.1 Окрашивание по Граму (модифицированный методХаккера)проводят по ГОСТ ISO 7218.
Это окрашивание бактериальных клеток позволяет описать морфологию бактерий и классифици
ровать их на две группы на основании способности образовывать в условиях испытания фиолетовое
окрашивание с кристаллическим фиолетовым.
Растворы иреактивы для окраски по Граму готовят по ГОСТ 10444.1.
9.1.1 Техника окрашивания
Послефиксации напредметномстеклебактериальнойпленки из 18—24-часовойкультурызалива
ютпленку раствором кристаллического фиолетового иоставляют на 1мин для протекания реакции.
Стекло в наклонном положении осторожно промывают несколько секунд водой. Наносят на стекло
раствор йода иоставляют на 1мин для протекания реакции. Стекло в наклонном положении осторожно
промываютнесколько секунд водой. Стекло в наклонном положении осторожнои непрерывно промыва
ютэтанолом (95 %) в течение не более 30 с до прекращения вымыванияфиолетового красителя. Стекло в
наклонном положении осторожнопромывают водойдля удаления этанола. Наносятнастекло раствор
сафранина и оставляют на 10 с. Стекло в наклонном положении осторожно промывают водой. Высуши
ваютстекло.
9.1.2 Оценка результатов
Стекло просматривают подмикроскопом, используядля этогосветосильныйобъективс масляной
иммерсией. Бактериальные клетки, окрашенные в синий или фиолетовый цвет, относят к грамположи-
тельным (Грам+); другие, окрашенныев цветаоттемно-розовогодо красного, относятк грамотрицатель-
ным (Грам-).
Учистыхкультур некоторыхтиповбактерий в полемикроскопамогутприсутствоватькакграмполо-
жительные. так и грамотрицательные клетки.
9.2 Проба на каталазу
Обнаружение этого фермента, который разлагает перекись водорода (Н,0,) на воду и кислород,
проводят, используя бульонную культуруили отдельную колониюнаагаровой среде. Если в конкретных
стандартах на методы испытаний не установлены другие требования, то во всех случаях питательная
среда недолжна содержать кровь. Исключение составляет кровь, подвергшаяся термической обработ
ке (среда с вареной кровью). В случае анаэробных бактерий перед добавлением перекиси водорода
культуру выдерживают 30с наоткрытом воздухе.
9.2.1 Проба на каталазу с колонией
На предметноестекло наносят отдельнодве каплираствора перекиси водорода смассовойдолей
3 % (1:10 по объему). Отделяют колонию от среды стерильным стеклом или пластиковой палочкой
9