ГОСТ 31928—2013
(но не металлической иглой) и осторожно диспергируют ее в одной из капель. Немедленно, а также
черезнесколько минут (ноне менее 1мин) отмечаютотсутствие илиобразование пузырьковкислорода. В
сомнительном случае покрываютобе капли предметным стеклом исравнивают наличие пузырьков в
обеих каплях. Наблюдения проводятвизуально или с помощью микроскопа при малом увеличении.
9.3 Бензидиновый тест
Приопределении молочнокислых микроорганизмов или бактерий рода Pediococcus вслучае, если
в характерных колониях обнаружены грамлоложительные. неподвижные микроорганизмы, дающие
положительную реакцию на каталазу, контролируют отсутствие цитохромов путем постановки бензиди-
нового теста.
Для этого выросшие на чашках Петри в течение 24— 48 ч колонии бактерий заливают раствором
бензидина. приготовленного по 6.1.14. После того, как раствор пропитает колонии, в чашку Петри зали
вают такой же объем 5 %-ной перекиси водорода. Молочнокислые микроорганизмы, в том числе бакте
рии рода Pediococcus, не содержат цитохромов. В случае присутствия цитохромов колонии
окрашиваются в голубовато-зеленый или ярко-голубой цвет.
9.4 Проба на псовдокаталазу
Наличие псевдокаталазы проводятна среде по 6.9.4 ссодержанием глюкозы 0.05 %. Посевы инку
бируют не более 5 сут при температуре (30 i 1) °Сили не более 3сут при температуре (37 i 1) °С. Опре
деленно псевдокаталазы проводятпо ГОСТ 30425.
10 Методы определения пробиотических микроорганизмов
10.1 Метод определения бактерий рода Bifidobacterium
Для выявления бактерийрода Bifidobacterium в исследуемом препарате необходимое разведение
препарата, подготовленное согласно разделу 4. высевают методом глубинного посева в полужидкие
питательныесреды всоответствиис 8.3или методом глубинногопосева в плотные питательныесреды в
соответствии с8.2. Посевы инкубируют неболее трех суток при температуре (37 ♦1) °С.
Подсчет колоний проводят через 24—48 ч. После инкубирования посевов их просматривают и
отмечают рост колоний, характерныхдля бактерий рода Bifidobacterium, затем проводятподсчет вырос
ших колоний.
Для подсчета колоний отбирают чашки Петри, на которых выросло от 15 до 150 характерных
колоний.
Из выросших колонийготовят препараты, которыеокрашиваютпо Грамупо9.1 иопределяютнали
чие каталазы по9.2.
Результаты оценивают визуально по каждой пробе отдельно.
Если при изучении культуральных, морфологических и биохимических свойств при определении
бактерий рода Bifidobacterium обнаружены грамлоложительные мелкозернистые слегка изогнутые с
бифуркацией на концах или без нее, расположенные одиночно, группами, иногда цепочками, палиса
дом. не образующие спор и капсул, каталазоотрицательные палочки, то дают заключение о том. что
обнаруженные микроорганизмы относятся к роду Bifidobacterium.
10.2 Метод определения бактерий рода Lactobacillus
Для выявления бактерий рода Lactobacillus в исследуемом препарате необходимое разведение
препарата, подготовленное согласно разделу 4. высевают на поверхность предварительно подсушен
ной агаризованной питательной среды, приготовленной поразделу7 методом глубинногопосева, изло
женным в 8.1.4, вагаризованные питательные среды, указанные в6.2. Посевы инкубируютнеболеетрех
суток при температуре (37
±
1) °С. После инкубирования посевы просматривают и отмечают рост коло
ний. характерныхдля бактерий рода Lactobacillus.
Подсчет колоний проводят через 48—72 ч. Для подсчета колоний отбираютчашки Петри, на кото
рых выросло от 15до 150 характерных колоний.
Из выросших колоний готовят препараты, окрашивают по Грамупо 9.1. наличие каталазы опреде
ляют по 9.2.
Результаты оценивают визуально по каждой пробе отдельно.
Если при изучении культуральных, морфологических и биохимических свойств при определении
бактерий рода Lactobacillus обнаружены неспорообразующие, грамлоложительные. неподвижные,
каталазоотрицательные палочки, то дают заключение о том. что обнаруженные микроорганизмы отно
сятся к роду Lactobacillus.
ю