ГОСТР ИСО 20541—2011
5.7 Буферный раствор фосфата калия, pH = 7,5
Взвешивают (57,6
±
0,1)мг гидрофосфатадикалия (К2НР04 -ЗН20) в мерную колбу вместимостью
100 см3с одной меткой. Растворяют в воде и перемешивают, доводятдо метки водой.
Взвешивают (17,0 ♦0,1) мг дигидрофосфата калия (КН2Р04) в мерную колбу вместимостью 50 см3
с одной меткой. Растворяют в воде и перемешивают, доводятдо метки водой.
С помощью устройства для измерения pH (6.18) регулируют pH раствора гидрофосфата дикалия
до pH 7,5 путем добавления растворадигидрофосфата калия.
При хранении при 4 °С буферный растворфосфата калияостается устойчивым две недели.
5.8 Раствор NADPH/FAD
Взвешивают (5.6
±
0,1) мг 3-никотинамидадениндинуклеотид-фосфата (восстановленного), соль
тетранатрия (|VNADPH-Na4, с массовой долей не менее 98 %), и (80.0
±
0,1) мг флавинадениндинуклео-
тида. сольдинатрия (FAD-Na2.с массовойдолей не менее88 %) в мерную колбу вместимостью 25 см3с
одной меткой.
Растворяютихв буферномрастворефосфатакалия(5.7). Разбавляютдо меткибуферным раство
ром (5.7) и перемешивают.
Раствор NADPH/FAD приготовляютнепосредственно перед использованием.
5.9 Раствор нитратредуктазы (NR)
Взвешивают 65 мг нитратредуктазы (NR) из Aspergillus niger (ЕС 1.6.6.2, лиофизат, содержащий
приблизительно 0,4 ед/мг) в пробирку вместимостью 10 см3.Добавляют 5 см3воды и перемешивают.
При хранении при 4 °С раствор нитратредуктазы остается устойчивым две недели.
5.10 Цветные реактивы
5.10.1 Раствор цветного реактива I: Сульфаниламид (NH2C6H4S02NH2)
Взвешивают400 мг сульфаниламида в мерную колбу вместимостью 50 см3с одной меткой (6.4).
Растворяют в растворе соляной кислоты, при необходимости нагревая в водяной бане.
Растворохлаждаютдо комнатнойтемпературы. Разбавляютдо метки раствором солянойкислоты
(5.4) иперемешивают. Полученный таким образом раствор реактива при необходимости фильтруют.
При хранении при 4 °С раствор цветного реактива I остается устойчивым четыре недели.
5.10.2 РастворцветногореактиваII:А/*(1-Нафтил)этилендиаминдигидрохлорид
(C10H7NHCH2CH2NH2 2HCI)
Взвешивают 50 мг N-(1-нафтил)этилендиамин дихлорида в мерную колбу вместимостью 50 см3с
одной меткой (6.4). Растворяют в подходящем количестве воды.
Разбавляют водой до метки 50 см3 и перемешивают. Полученный раствор при необходимости
фильтруют.
При хранении при 4 °С раствор цветного реактива IIостается устойчивым четыре недели.
5.11 Комплекты реактивов также имеются в продаже. При использовании таких комплектов необ
ходимо строго следовать требованиям настоящегостандарта (в частности, вслучае 5.8).
6Оборудование
Всю стеклянную посудутщательноочищаютипромывают водойдля гарантииотсутствия нитратов
и нитритов.
Обычное лабораторное оборудование, вчастности, следующее:
6.1 Аналитические весы, обеспечивающие взвешивание сточностью до 0,1 мг.
6.2 Контейнердля пробы с герметической крышкой.
6.3 Конические колбы вместимостью 100,500 и 1000 см3с притертыми стеклянными пробками.
6.4 Мерные колбысноминальной вместимостью 25.50,100 и 1000см3всоответствии сИС01042,
классА.
6.5 Пипетки вместимостью 1, 2, 5 и 10 см3 в соответствии с ИСО 648. класс А. или ИСО 835. При
необходимостидопускается использовать бюретки вместо пипеток.
6.6 Граду ированные пипеткидля частичной подачи, используемые в ферментных тестах.
6.7 Градуированные цилиндры вместимостью 20 и50 см3.
6.8 Стаканы вместимостью 20 и 50 см3.
6.9 Центрифуга с охлаждающим устройством, обеспечивающая центрифугированиечашек (6.10)
и конических мембран (6.21)с центробежным ускорением ЗОООд.
6.10 Чашки центрифугидиаметром 15 мм.
6.11 Мембранный фильтрс размером пор0,45 мкм для использования со шприцем.
з