ГОСТР ИСО 20541—2011
4 Сущность метода
Испытательныйобразецдиспергируютвтеплойводе. Жирибелкиудаляютилипосредством осаж
дения с использованием реактивов Карреза. или посредством центробежного ультрафильтрования с
использованием конических мембран (см. примечания 1и 2). Нитратвосстанавливаютдо нитрита в час ти
фильтрата посредством нитратредуктазы. При добавлении сульфаниламида и
Л
Ц1-нафтил)этилен-
диамида дихлорида проявляется красно-фиолетовый азокраситель в частях как невосстановленного
фильтрата (для нитрита), так и восстановленного раствора (для нитрата), оптическую плотность
измеряют придлине волны 540 нм (или Нд546 нм).
Содержание нитрита в пробе и общее содержание нитрита после восстановления нитрата вычис
ляют, сравнивая измеренные оптические плотности с оптическими плотностями серии калибровочных
растворов нитрита натрия. Содержание нитрата определяют по разности междуэтими двумя содержа
ниями.
П р и м е ч а н и я
1 Две альтернативные процедуры для удаления жира и белка описаны в 9.2.1 и 9.2.2.
2 Для сухой сыворотки, концентрата сывороточного белка и аналогичных продуктов предпочтительнее
использовать ультрафильтрование вместо осаждения Карреза. так как последнее часто приводит к помутнению и в
результате к плохой прецизионности.
3 Низкий уровень эндогенного нитрита не протоколируют, но учитывают в матричном холостом растворе.
5 Реактивы
Если не установлено иначе, используют только реактивы признанной аналитической чистоты без
нитратов и нитритов и воду, соответствующую классу3 по ИСО 3696. как минимум, также без нитратов и
нитритов. Для растворов фермента или кофермента используют свежеприготовленную воду двойной
дистилляции или эквивалентной чистоты.
5.1 Раствор гидроксида натрия, с (NaOH)= 1моль/см3.
5.2 Раствор хлорида натрия, с (NaCI) =0.9 г/100 см3.
5.3 Соляная кислота, р20(НС1) = 1,19 г/см3.
5.4 Раствор соляной кислоты, с (HCI) =2 моль/дм3
Тщательнодобавляют 160 см3соляной кислоты (5.3) приблизительно к 700 см3воды в мерной кол
бе вместимостью 1000 см3с одной меткой (6.4) при регулярном вращении. Охлаждают содержимое до
комнатной температуры. Разбавляютдо метки водой итщательно перемешивают.
5.5 Реактивы Карреза
5.5.1 Реактив Карреза I: Раствор гексацианоферрата (II) калия, с (KJFefCNy •ЗН20) = 150 г/дм3.
Растворяют 15,0 г тригидратагексацианоферрата (II)калия вводевмернойколбевместимостью 100 см3 с
одной меткой (6.4). Разбавляютдо метки водой иперемешивают.
5.5.2 Реактив Карреза II: Раствор сульфата цинка, с (ZnS04•7Н20) = 300 г/дм3. Растворяют 30.0 г
гептагидратасульфата цинкав воде в мернойколбе вместимостью 100 см3содной меткой(6.4). Разбав
ляютдо метки водой иперемешивают.
5.6 Стандартные растворы
5.6.1 Исходный раствор нитрита натрия (NaNOz)
Взвешивают (75,0 ♦0.1)мгпредварительновысушенного(при 102 °С втечение2 ч)нитрита натрия
в мерную колбу вместимостью 100 см3с одной меткой. Растворяютв воде и перемешивают, доводятдо
метки водой. Полученный исходный растворсодержит 500 мг нитрита налитр.
Приготовляют калибровочные растворы, разбавляя исходный раствор водой, чтобы получить
несколько растворов с различными концентрациями нитрита от 0,05до 5,0 мг/дм3.
Прихранении при комнатной температуре исходныйраствор нитрита натрия остается устойчивым
один день.
5.6.2 Исходный раствор нитрата калия (KN03)
Взвешивают (81.5
±
0,1) мгпредварительно высушенного (при 102 °С в течение 2ч) нитрата калия
в мерную колбу вместимостью 100 см3с одной меткой. Растворяют в воде и перемешивают, доводятдо
метки водой. Полученный исходный растворсодержит 500 мг нитрата налитр.
Приготовляют калибровочные растворы, разбавляя исходный раствор водой, чтобы получить
несколько растворов с различными концентрациями нитрата от 0,05до 5,0 мг/дм3.
При хранении при4 °С исходный раствор нитрата калия остается устойчивым одну неделю.
2