ГОСТ Р 52814— 2007
Засевают штрихом скошенную поверхность агара (среды Олькеницкого) и уколом — столбик. Инку
бируют при температуре (37 ± 1) °С в течение (24 ± 3) ч.
Интерпретируют изменения всреде следующим образом:
а)столбикагара (среды Олькеницкого)
- желтый — глюкоза положительная (глюкозу ферментирует);
- красный или неизменившийся — глюкоза отрицательная (глюкозу не ферментирует);
- черный — образование сероводорода;
- пузырьки или разрывы — образование газа из глюкозы;
б) скошенная поверхность агара (среды Олькеницкого)
- желтая —лактоза и/илисахароза положительные (лактозу и/или сахарозу ферментирует);
- красная или неизменившаяся —лактоза и сахара отрицательные (ни лактозу, ни сахарозу не фер
ментирует).
Агар Клиглера содержитдва сахара, поэтому по скошенной поверхности учитывают только фермен
тацию лактозы.
Типичные культуры бактерий рода Salmonella показывают щелочную (красную) поверхность и кислый
(желтый) столбик с образованием газа (пузырьков) и примерно в 90% случаев образуется сероводород
(черный агар).
Если изолированы лактозоположительные бактерии рода Salmonella, то поверхность TSI-arapa жел
тая. Предварительное определение культур бактерий рода Salmonella не может основываться только на
результатах теста на TSI-arape.
Дальнейшему изучению подвергают такжелактозоположительные бактерии или бактерии, не образу ющие
сероводород, но обязательно ферментирующие глюкозу с образованием или без образования газа.
8.5.3.3 Агар с мочевиной (агар Кристенсена) (см. 5.2.11)
Культуры пересевают штрихом на поверхность агара Кристенсена с мочевиной. Посевы инкубируют
при температуре (37 ± 1) °С в течение (24 ± 3) ч, наблюдая за посевами через определенные промежутки
времени.
При положительной реакции — расщеплении мочевины свыделением аммония цветфенолового крас
ного меняется от розового до светло-вишневого.
Для уреазоположительных бактерий реакция часто становится видимой после 2 ч инкубирования.
Бактерии рода Salmonella не расщепляют мочевину.
8.5.3.4 L-лизиндекарбоксилазная среда (см. 5.2.12)
Инокулируют снизу жидкую среду. Посевы инкубируют при температуре (37 ± 1) °С в течение
(24 ±3)ч.
Помутнение и пурпурный цвет среды после инкубирования указывают на положительную реакцию.
Желтый цвет указывает на отрицательную реакцию.
Salmonella Paratyphi А не образует L-лизиндекарбоксилазу, остальные образуют.
8.5.3.5 Определение р-галактозидазы (5.2.13)
Суспендируют петлей культуру в 0,25 см3физиологического раствора, прибавляют одну каплю толу
ола и встряхивают пробирку. Помещают пробирку в водяную баню при температуре 37 °С и оставляют
примерно на 5 минут. Затем добавляют 0.25 см3реактива для определения р-галактозидазы и перемеши
вают.
Оставляют пробирку в водяной бане при температуре 37 °С в течение (24 ± 3)ч, наблюдая за измене
нием цвета через определенные промежутки времени.
Желтый цвет указывает на положительную реакцию. Изменение цвета обнаруживается примерно че
рез 20 мин.
Бактерии рода Salmonella, кроме S.arizonae. не обладают р-галактозидазой.
Для определения р-галактозидазной активности допускается использование ONPG-дисхов.Для этого
испытуемые культуры высевают на среду, содержащую лактозу в концентрации 0,1 %, или агар Клиглера.
или трехсахарный агар, или агар Олькеницкого. Посевы инкубируют в течение (18 ♦ 2) ч при температуре
(37 ± 1) СС. Петлей отбирают выросшую культуру и готовят из нее густую суспензию в 0,5 см3стерильной
дистиллированной воды. К полученной суспензии добавляют один ONPG-диск и помещают в водяную
баню при температуре (37 ± 1) °С. Желтое окрашивание, появившееся через 15 — 20 мин. указывает на
положительную реакцию. Для окончательного учета отрицательного результата посевы продолжают инку
бировать в течение 2,4 и 24 ч.
8.5.3.6 Определение образования ацетоима (реакция Фогес-Проскауера) (5.2.14)
Суспендируют петлей испытуемую культуру в стерильной пробирке, содержащей 3 см3VP среды или
мясо-пелтонного бульона с глюкозой.
1397