ГОСТ Р 52814— 2007
В. 10 Среды с углеводами (среды Гисса)
Среды с углеводами (среды Гисса) готовят по ГОСТ 10444.1 или используют сухие среды с углеводами,
которые готовят по инструкции, указанной на этикетке.
В.11 Трехсахарный железистый агар (TSI-arap)
В.11.1 Состав:
- мясной экстракт — 3.0 г;
- дрожжевой экстракт — 3.0 г;
- пептон — 20.0 г;
- хлористый натрий (NaCI) — 5.0 г;
-лактоза — 10,0 г;
- сахароза — 10.0 г;
- глюкоза — 1,0 г;
- железо (III) цитрат— 0.3 г;
- тиосульфат натрия — 0.3 г.
- феноловый красный — 0.024 г (или 6 см3 раствора, приготовленного no В.5.2. если среда состоит из
отдельных компонентов);
-агар — от 9 до 18 г;
- вода — 1000 см3.
В.11.2 Приготовление
При нагревании растворяют компоненты или дегидратированную основу среды в воде. Устанавливают та
кой pH, чтобы после стерилизации он составлял (7.4 ± 0.2) при температуре 25 ’С. Переносят среду в пробирки по
7 — 8 см3. Стерилизуют 15 мин в автоклаве при (121 ± 1) °С. Затем пробирки оставляют в наклонном положении
так. чтобы высота столбика среды составляла около 2.5 см. а скошенная поверхность над ним — 5 см.
Допускается использование агара Клиглера или среды Олькеницкого. Среды готовят по инструкциям,
указанным на этикетках.
В.12 Агар с мочевиной (агар Кристенсена)
В.12.1 Основа среды
В.12.1.1 Состав:
- пептон — 1.0 г;
- глюкоза — 1.0 г;
- хлористый натрий (NaCI) — 5.0 г;
- однозамещенный фосфорнокислый калий (КН2РО<) — 2.0 г;
- феноловый красный — 0,012 г (или Зсм3раствора, приготовленного по В.5.2. если среда состоит из отдель
ных компонентов):
агар — от 9 до 18 г;
вода— 1000 см3.
В.12.1.2 Приготовление
При нагревании растворяют компоненты или дегидратированную основу среды в воде. Устанавливают
такой pH. чтобы после стерилизации он составлял (6.8 ± 0.2) при температуре 25 "С. Основу среды в определен
ных объемах разливают в колбы или флаконы и стерилизуют в автоклаве при температуре (121 ± 1)”Св
течение 15 мин.
В.12.2Раствор мочевины
В.12.2.1 Состав:
- мочевина — 40 г;
- вода до конечного объема — 100 см3.
В.12.2.2Приготовление
Мочевину помещают в колбу вместимостью 100 см3, растворяют в воде, объем раствора доводят водой до
метки. Раствор мочевины стерилизуют фильтрацией по ГОСТ 26670 через фильтры с размером пор 0,22 мкм или
текучим паром в течение 30 мин.
В.12.3 Раствор фенолового красного
В.12.3.1 Состав и приготовление — по В.5.2.
В. 12.4 Готовая среда
В.12.4.1 Состав:
- основа (см. В.12.1) — 950 см3;
- раствор мочевины (см. В. 12.2) —50 см3.
В.12.4.2 Приготовление
Прибавляют с соблюдением правил асептики раствор мочевины к основе, предварительно расплавленной
и охлажденной до температуры от 44 ”С до 47 ’С. Разливают готовую среду в стерильные пробирки 7 — 8 см3.
После стерилизации среду скашивают по В.11.2.
16148