ГОСТ Р 52814— 2007
Приложение В
(обязательное)
Состав и приготовление питательных сред и реактивов
В.1 Забуференная пептонная вода
В.1.1 Состав:
- пептон — 10.0 г
- хлористый натрий — 5,0 г.
- двузамешенный фосфорнокислый натрий 12-водный (Na2HP04-12H20) — 9.0 г,
- однозамещенный фосфорнокислый калий (КН2Р04) — 1.5 г;
- вода — 1000 см3.
В.1.2 Приготовление
При нагревании компоненты растворяют в воде. Устанавливают такой pH, чтобы после стерилизации он
составлял (7.0 ± 0.2) при температуре 25 "С. Среду разливают во флаконы подходящей вместимости с учетом
добавления необходимой навески продукта. Если навеска равна 25 г, то забуференную пептонную воду разливают по
225 см3. Стерипизуют 15 мин в автоклаве при температуре (121 ±1) ®С.
В.2 Среда Раппапорта-Вассилиадиса с соей (RVS-бульон)
В.2.1 РастворА
В.2.1.1 Состав:
- ферментативный гидролизат сои — 5.0 г;
- хлористый натрий — 8.0 г.
- фосфорнокислый однозамещенный калий (КН2Р04)—1.4 г;
- фосфорнокислый двузамешенный калий (К2НР04)— 0.2 г,
- вода —1000 см3.
В.2.1.2 Приготовление
Компоненты растворяют в воде при нагревании до температуры около 70 ’С. Раствор готовят за день до
приготовления RVS-бульона.
В.2.2Раствор В
В.2.2.1 Состав:
- хлористый магний 6-водный (МдС12-6Н20) — 400 г;
- вода — 1000 см3.
В.2.2.2 Приготовление
Хлористый магний растворяют в воде. Поскольку эта соль очень гигроскопична, рекомендуется из новой
открытой упаковки растворять ее по определенной схеме. Например, к 250 г хлористого магния 6-водного добав
ляют 625 см3 воды, получая раствор объемом 788 см3 массовой концентрации 31.7 г/100 см3. Состав раствора
соответствует В.2.2.1. Раствор переносят в бутылку из темногостекла с притертой пробкой и хранят гри комнатной
температуре не более двух лет.
В.2.3 Раствор С
В.2.3.1 Состав:
- малахитовый зеленый оксалат — 0.4 г;
- вода — 100 см3.
В.2.3.2 Приготовление
Малахитовый зеленый оксалат переносят в фарфоровую ступку и постепенно растворяют в воде. Раствор
переливают в мерную колбу вместимостью 100 см3 и доводят водой до метки. Раствор переносят в бутылху из
темного стекла, хранят при комнатной температуре не бопее 8 мес.
В.2.4 Готовая среда
В.2.4.1 Состав:
- раствор А (см. В.2.1) — ЮООсм3;
- раствор В (см. В.2.2) — 100 см3;
- раствор С (см. В.2.3) — 10 см3.
В.2.4.2 Приготовление
Прибавляют к 1000 см3раствора А 100 см3раствора В и 10 см3раствора С. Устанавливают такой pH. чтобы
после стерилизации он составлял (5.2 ± 0,2). Перед использованием среду разливают по пробиркам по 10 см3.
Стерилизуют 15 мин в автоклаве при температуре (115 ± 1) "С. Рекомендуется использовать среду в день приго
товления. При необходимости допускается готовую среду хранить по ГОСТ 10444.1.
Следует учитывать, что на этой среде не растет S. Typhi.
12
144