С. 6 ГОСТ 10444.7-86
или фильтровальной бумаги не допускается. 11одготопленную таким образом исходную жидкость пере
носят в стерильную колбу; хранят при температуре (4±2) ‘С не более 7 сут.
4.2. Подготовка продукта к испытанию для выявления и выделения С. botulinum
4.2.1. Для выяаления и выделения С. botulinum отбирают 100 см’/r продукта из различных мест,
имеющих и неимеющих изменения: гомогенизируют по ГОСТ 26669—85 или доводят до однородной
консистенции. Допускается для посева использовать продукт, оставшийся после отделения или экстра
гирования из него жидкой фазы.
Для выявления в любых продуктах вегетативных клеток и спор С. botulinum приготавливают не
менее четырех навесок массой 20,0-25,0 г (см5) любого продукта.
5. ПРОВЕДЕНИЕ ИСПЫТАНИЯ
5.1. Выявление богулннических токсинов
5.1.1. Выявление ботулинических токсинов проводят по табл. I или одновременно с использова
нием противоботулинических антитоксических сывороток по табл. 2. Исследования проводят с исход
ной жидкостью (ИЖ), если в ней ботулинический токсин не обнаружен, то ИЖ обрабатывают
протеолитическим ферментом.
Для выявления ботулинических токсинов по табл. 1 используют исходную жидкость. В две про
бирки пипеткой с резиновой грушей переносят по 2—3 см \ а в третью —2,7 см’ исходной жидкости.
В последнюю пробирку стерильной пипеткой добавляют 0.3 см3раствора трипсина или панкреатина. В
смеси исходной жидкости с ферментом с помощью раствора гидроокиси натрия или раствора соля ной
кислоты устанавливают pH (6,0±1). Затем пробирку со смесью термостатируют при (37±1)‘С в
течение 1 ч. но не дольше, периодически перемешивая содержимое. Культуральную жидкость,
полученную из посевов продуктов в питательную среду, содержащую трипсин или панкреатин, проте
олитическим ферментом не обрабатывают.
Вторую пробирку с исходной жидкостью кипятят на водяной бане в течение 10 мин и охлаждают
до комнатной температуры. Первую пробирку с исходной жидкостью оставляют без обработки.
Хранение исходной жидкости, обработанной протеолитическим ферментом, не допускается.
Непосредственно после окончания обработки исходной жидкости протеолитическим ферментом
ставят биологическую пробу на белых мышах.
5.1.2. По 0,5—1.0 см3 подготовленной соответствующим образом исходной жидкости вводят в
зависимости от условий опыта внутрибрюшинно не менее чем двум белым мышам, в соответствии с
приложением 2. Животных осматривают через 1, 2,4. 12 ч и далее не менее двух раз в день в течение 72
ч. Ботулинические токсины не вызывают молниеносной гибели животных; клинические симптомы
ботулинической интоксикации животных токсином типа Е, как правило, поваляются через 2—4 ч.
токсином других типов - через 10—12 ч после инъекции. Высокие концентрации токсина могут
вызвать гибель мышей в течение 1—2 ч без прояаления клиники ботулизма. В этом случае ставят
повторно биологическую пробу с исходной жидкостью, разведенной в 10—100 раз. Мыши болеют и
погибают не раньше, чех» через 2 ч после шгьекцни токсина, чаше всего в течение 4—6 ч. Клинические
симптомы болезни и гибели мышей при ботулинической интоксикации очень характерны: шерсть
взъерошивается, дыхание затруднено, .мышцы брюшной стенки ослаблены и западают, давая симптом
«осиная талия»; появляются судороги, паралич задних конечностей; гибель при явлениях полного
паралича из-за остановки дыхания.
5.1.3. При наличии в исходной жидкости ботулинического токсина болеют и погибают с клини
ческими симптомами ботулинической интоксикации те животные, которым введена необработанная
протеолитическим ферментом жидкость, и. если фермент не инактивировал ботулинический токсин, то
болеют и погибают животные, которым введена жидкость, обработанная протеолитическим фер
ментом. При наличии в исходной жидкости ботулинических протоксинов болеют и погибают с клини-
ческими симптомами ботулинической интоксикации в первую очередь те животные, которым введена
обработанная ферментом жидкость; мыши, которым введена не обработанная ферментом жидкость,
могут переболеть, но не погибают или погибают позже. Мыши, которым введена прокипяченная
жидкость, должны оставаться на всем протяжении опыта здоровыми. Если болеют или погибают
мыши, получившие прокипяченную и непрокипяченную жидкость, то исходную жидкость разводят
буферным желатино-фосфатным раствором в соотношении 1 : I и 1 :9 и повторяют исследования по
252