С. 10 ГОСТ 10444.7-86
5.3. Серологическое тниироваине токсина С. botulinum
5.3.1. Подтверждение присутствия и установление типа ботулиннческого токсина защитным
тестом
5.3.1.1. Присутствие ботулинического токсина в исходной жидкости обнаруживают путем поста
новки биологической пробы на мышах, защищенных иммунизацией противоботулиническими анти
токсическими сыворотками типов Л, В. Е (и, если представляется возможным, типов С, D. F, G).
Сыворотка типа С должна содержать антитоксины типов С, и С2. Поливалентные сыворотки и типы
поливалентных сывороток для опыта подбирают в зависимости от вида анализируемого продукта и
предполагаемого типа ботулинического токсина в соответствии с комбинациями и порядком, приве
денными в табл. 2 и 3.
5.3.1.2. Для типирования с помощью защитного теста используют противоботулинические
антитоксические типоспеинфические сыворотки, разведенные физиологическим раствором до кон
центрации 1 М Е/см\ Разведенные сыворотки хранят при температуре <4±2) ’С в течение не более 10 сут.
Если при использовании сывороток, разбавленных до 1 МЕ/с.м\ установить тип ботулнническо-
го токсина не удается, то биологическую пробу повторяют с сыворотками, разбавленными до концен
трации 0.1 М Е/см\
При использовании противоботулинических антитоксических типоспецифическнх сывороток,
содержащих 1 МЕ/см’. исходную жидкость (и/или исходную жидкость, обработанную протеолитичес
ким ферментом) разводят буферным желатино-фосфатным раствором в соотношениях, позволяющих
получить не менее трех последовательных разведений жидкости, содержащей в 10, 100 и 1000 раз
меньше MLD, чем обнаружено в исходной жидкости.
5.3.1.3. При постановке защитного теста для типирования ботулинических токсинов каждому
животному внутрибрюшинно вводят по 0.5 см3моновалентной, двух-, трех- или поливалентной сыво
ротки. Для инъекции одного типа сыворотки или их смеси каждой группе животных применяют
отдельный шприц. Через 60 мин после введения сывороток животным вводят исходную жидкость,
подготовленную по п. 5.3.1.2. Введение животным исходной жидкости начинают с наибольшего ее
разведения, используя один шприц для группы мышей, получивших моновалентную сыворотку одно го
типа или двух-, трех- или поливалентную сыворотку, состоящую из одной комбинации моновален тных
сывороток.
5.3.1.4. При наличии в исходной жидкости ботулинического токсина болеют и погибают с кли
ническими симптомами ботулнннческой интоксикации те мыши, которым введена сыворотка, не
гомологичная типу ботулинического токсина в исходной жидкости. Погибают также мыши, которые
получили гомологичную сыворотку в объеме, недостаточном для защиты от высокой дозы токсина.
Мыши, получившие сыворотку, в состав которой входит моновалентная сыворотка, гомологичная
типу ботулинического токсина в исходной жидкости, остаются живы. Если болеют и погибают все
животные, то биологическую пробу повторяют, применяя более разбаапенную исходную жидкость
или ранее не использованные комбинации моновалентных сывороток.
5.3.2.Подтверждение присутствия и установление типа ботулинического токсина реакцией нейт
рализации
Присутствие ботулинического токсина в исходной жидкости подтверждают реакцией нейтрализа
ции с кониенгрированными противоботулиническими антитоксическими сыворотками в случаях, когда
имеется для этого достаточное количество сывороток и исходная жидкость содержит более 4
мышиных MLD/
c
m
3.
Допускается одновременное установление присутствия и типа ботулинического токсина, путем
постановки развернутой реакции нейтрализации.
Концентрированные сыворотки применяют при необходимости с целью подтверждения присут
ствия ботулинических токсинов в исходной жидкости в наиболее короткий сроке наименьшим коли
чеством животных без предварительного определения титра ботулиннческого токсина.
5.3.2.1.Для постановки реакции нейтрализации и типирования ботулинических токсинов
концентрированными антитоксическими диагностическими противоботулиническими сыворотка
ми используют сухие сыворотки, имеющие титр в пределах: для типа Л - 200-440 ME: для типа
В —100-200 ME; для типа Е — 200—400 ME, по возможности реакция ставится с сыворотками типа
С - 200-300 ME. типа F - 50 ME.
256