ГОСТ 10444.7-86 С. 11
Непосредственно перед использованием ампулы с сухими сыворотками вскрывают, добавля
ют в каждую ампулу I см3дистиллированной воды и, легко встряхивая, добиваются полного раство
рения сыворотки. Затем сыворотки типов Л. В. С, Е разводят в 10 раз, а сыворотки типа F — в 5
раз физиологическим раствором. Хранят при температуре (4±2) *С в течение не более 10 сут.
5.3.2.2. При использовании диагностических сывороток присутствие ботулинических токсинов
в исходной жидкости или исходной жидкости, обработанной протеолитическим ферментом
подтверждают реакцией нейтрализации. Для проведения реакции нейтрализации в чистую пробирку
стерильной пипеткой с грушей переносят 2,4 см’ исходной жидкости или исходной
жидкости, обработанной протеолитическим ферментом. Затем в нее вносят по 0,12 см’ сывороток
пяти типов С. botulinum. или по 0,15см3 сывороток четырех типов С. botulinum, или по 0,2
см3трех типов С. botulinum. Каждый тип сыворотки отбирают для приготовления поливалентной
сыворотки отдельной стерильной микропипеткой. После выдержки в течение 30—45 мин
приготовленную смесь вводят по I см3белым мышам. В случае гибели животных реакцию повторяют с
исходной жидкостью или жидко стью, обработанной протеолитическим ферментом, разбавленной
буферным желатино-фосфатным ра створом в соотношении 1 : 9, а в случае необходимости - в
большей степени. Результаты реакции оценивают по п. 5.3.1.4.
5.3.2.3. Для установления типа ботулинического токсина с помощью диагностических сывороток
стерильной пипеткой с резиновой грушей по 2,4 см3 исходной жидкости или жидкости, обработанной
протеолитическим ферментом, разливают в несколько пробирок, затем в каждую пробирку отдельны ми
стерильными пипетками добавляют по0.6 см’ моновалентных сыпороток для тнпировання ботули
нического токсина одного типа, по 0.3 см3моновалентных сывороток для типирования смеси ботули
нических токсинов двух типов и по 0.2 см3моновалентных сывороток для тнпировання смеси ботули
нических токсинов трех типов в соответствии с табл. 3.
В случаях, если необходимо избежать перекрестных неспепнфических реакций с негомологичны
ми сыворотками для разделения ботулинических токсинов типов Е и F, С и D и других типов,
концентрированные сыворотки разводят до концентрации 1(0,1) МЕ/см3.
5.3.2.4. Для постановки развернутой реакции нейтрализации и типирования ботулинического
токсина сыворотками после их разведения in vitro поступают следующим образом. В пробирку
пипеткой с резиновой грушей переносят исходную жидкость или жидкость, обработанную протеоли
тическим ферментом и, при необходимости, готовят одной пипеткой в пробирках серию разведений
этой жидкости в соотношении, подобранном по п. 5.2.1. Затем другой пипеткой с резиновой грушей
последовательно, начиная с наибольшего разведения, переносят по 2.4 см3 из каждого разведения
жидкости в серию из нескольких пробирок. Количество пробирок для каждого разведения соответ
ствует числу типов моно-, двух-, трех- и поливалентных комбинаций сывороток, используемых в
реакции нейтрализации и типировании ботулинических токсинов. В каждую серию пробирок с
разведенной исходной жидкостью, начиная с наибольшего разведения, стерильной пипеткой добавля ют
по 0.6 см3 моно-, двух-, трех- или поливалентной сыворотки одного состава. Приготодленные смеси
выдерживают в течение 30-45 мин при комнатной температуре. После окончания выдержки по 1
см3смеси, отобранной от каждой пробирки, вводят двум белым мышам. Мыши, которые получили
смеси, содержащие моно-, двух-, трех- или поливалентные сыворотки, гомологичные типу
ботулинического токсина или нескольким типам ботулинического токсина, содержащегося в
исходной жидкости, остаются живы: мыши, не получившие сыворотки гомологического типа, болеют и
погибают с симптомами ботулннической интоксикации. Допускается одновременно подсчитывать титр
токсина.
5.4.Выявление С. botulinum
5.4.1.Дтя выявления С. botulinum питательные среды для высева навесок продукта выбирают по
табл. 4, используя одну из сред, предложенных для высева 1-й навески, и одну из сред, предложенных
для пысева 3-й навески.
257