ГОСТ 10444.7-86 С. 3
малахитовый зеленый;
медь сернокислую по ГОСТ 4165—78. 1 %-ный раствор. Применяют для постановки биуретовой
реакции в питательных средах;
натрия гидроокись по ГОСТ 4328 -77. раствор с массовой долей гидроокиси натрия 4 %. Приме
няют для подщелачивания питательных сред;
натрий углекислый по ГОСТ 83-79. 0,3—1 %-ный раствор. Применяют для кипячения игл для
шприцев (см. приложение 3);
натрия тиогликолят;
несши цин;
перекись водорода по ГОСТ 177-88. раствор с массовой долей перекиси водорода 3 %;
растворы фосфатного буфера:
для приготовления фосфатного буфера готовят растворы:
А —раствор однозамешенного фосфорнокислого калия (КНгР04 —квалификации х. ч., дважды
перекристаллизованный или для pH-метрии) массовой концентрацией 9,078 г/дм’;
Б — раствор двузамешенного фосфорнокислого натрия (Na2HP04• 2Н ,0 квалификации х. ч..
дважды перекрнсталлизованный) массовой концентрацией 11,876 г/дм5;
для приготовления 100 см’ фосфатного буфера:
с pH 6.0 -
с pH 6,2 -
к 12 см3 раствора Б добавляют 88 см ’ раствора А;
к 18,5 см3раствора Б добавляют 81,5 см ’ раствора А;
с pH 6.8 — к 50 см5раствора Б добавляют 50 см’ раствора А,
раствор фосфатного буфера с-pH 6.0 применяют для растворения трипсина;
растворы желатино-фосфатного буфера:
в 100 см’ фосфатного буферного раствора с определенным значением pH вносят 0.6 г желатина,
дают набухнуть желатину и нагревают до полного растворения желатина. Стерилизуют при температуре
(110±1) *С в течение 15 мин;
раствор желатино-фосфатного буфера с pH 6,2 применяют в качестве стабилизатора ботулиничес-
ких токсинов. В случае выявления ботулннического токсина типа А переходят на расгвор желатино-
фосфатного буфера с pH 6,8:
смесь реактивов для создания анаэробных условий готовят по ГОСТ 10444.1-84. Допускается
использование талька вместо инфузорной земли;
трипсин, раствор: 1,5 г трипсина растворяют в 100 см3 раствора фосфатного буфера с pH 6,0.
Раствор трипсина стерилизуютфильтрованием через керамический или мембранный фильтр с разме
рами пор 0,40-0.45 мкм или другой эквивалентный фильтр. Стерильный раствор трипсина вносят в
регенерированную и охлажденную питательную среду асептически непосредственно перед использова
нием из расчета I см3раствора трипсина на 15 см5среды. Применяют для активизации протоксина С.
botulinum:
гидролизат казеина ферментативный;
фломастеры (применяютдзя метки мышей);
циклосерин:
эмульсию яично-желточную: свежие куриные яйца моют, ополаскивают холодной водой, опус
кают в 70 %-ный спирт и высушивают. Разбивают каждое яйцо, соблюдая правила асептики, в
стерильную чашку Петри и отделяют желток от белка. Помещают желтки в стерильную колбу
или флакон с четырьмя объемами стерильной воды и энергично перемешивают. Нагревают смесь на
водя ной бане при температуре (45±0,5) *С в течение 2 ч. оставляют на 18-24 ч при температуре от
0 до плюс 5 *С дзя того, чтобы сформировался осадок.
С соблюдением правил асептики собирают эмульсию над осадком. Эмульсию хранят при темпера
туре 0 - плюс 5 *С не более 72 ч. Применяют дня определения способности С. botulinum давать
положительную реакцию с яичным желтком.
3. ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ
3.1.При приготовлении питательных сред дзя выяазения и культивирования С. botulinum жидкие
и полужидкие среды разливают во флаконы или в пробирки таким образом, чтобы высота столбика
среды составляла не менее 10 см, объем среды - 3 0 - 100 см3.
249