ГОСТ 10444.7-86 С. 9
Продолжение т ам. J
Н о м ер
иармапгд
опы та
Анализируемый продукт
Т и п ы и сп о л ьзуем ы х противобо1>"
хи м ич еск их сы вор оток и их
к о м б н п и и и и
Т и п ы вы явл яем ы х ботул и нн
чеекмх т о к си н о в иди их
к о м б и н а ц и и
Любой, нс содержащий типы
ботулииических токсинов или
их комбинаций, иыяатиемыс но
1—4-му вариантам опыта
Трехвалентные типы: ABF
ВСЕ
ВСТи
другие
Поливалентная типа ABCEF
А + В + F (Е)
В -*• C(D) + E(F)
В + C(D) + F(E) и другие
А + В + C(D) + Е + F
6
Тот же. нс содержащий тины
ботулииических токсинов или их
комбинаций, выявляемые но 1—
5-му вариантам опыта
Моновалентная типа D1>(С>
Моновалентная типа GG
Поливалентная типов А. В. С,( A+B+C+D + E+ F+G)
D. Е. F и другие комбинации, в соот
ветствии с комбинациями ис
пользованной сыворотки
П р и м е ч а н и я :
1. Исследование начинают с использовании комбинации с наибольшим количеством типов сывороток,
и в случае, если использованная комбинация типов сывороток защищает мышей от гибели, типируюг ботули-
ничсские токсины моно-, би- или трехвалентными сыворотками, указанными в соответствующем варианте
опыта.
2. Вскобках указана возможная перекрестная реакция при тонировании ботулиничсских токсинов.
нышсописапному методу с тем, чтобы избежать гибели животных от прокипяченной жидкости или
подтвердить, что клинические признаки гибели животных по всем вариантам опыта не соответствуют
признакам ботулинической интоксикации.
При наличии в исходной жидкости ботулииических токсинов все последующие исследования
проводят с необработанной жидкостью (ИЖ); ботулииических протоксинов —с жидкостью, обрабо
танной протеолитическим ферментом (ИЖТ).
5.2. Определение титра ботулинического токсина
5.2.1. Для определения титра ботулинического токсина используют исходную жидкость,
содержащую ботулинический токсин, или ту же жидкость, содержащую протоксин и обработанную
непосредственно перед поставкой биологической пробы протеолитическим ферментом. Пинеткой с
резиновой грушей по 1 см’ исходной жидкости или жидкости, обработанной протеолитическим
ферментом переносят в две пробирки: п одну стерильной пипеткой добавляют I см \ получая разве
дение 1:1, в другую - 9
c
m
j
буферного желатино-фосфатного раствора, получая разведение I : 9.
Из пробирки с жидкостью, разведенной в 10 раз. стерильной пипеткой с резиновой грушей отбира ют 1
см’ и переносят в третью пробирку, в которую стерильной пипеткой добавляют 9 см; раствора
желатино-фосфатного буфера, получая разведение 1:99. При ограниченном объеме исходной жидкости
из нее готовят те же разведения, по получают вышеуказанные соотношения между исходной
жидкостью и желатино-фосфатным буфером, используя меньший объем исходной жидкости и раствора
желатино-фосфатного буфера. С полученными разведениями исходной жидкости (или жид кости,
обработанной протеолитическим ферментом) ставят биологические пробы в порядке, приве денном
втабл.1.
5.2.2. Опытным путем подбирают такие разведения исходной жидкости или жидкости, обрабо
танной протеолитическим ферментом, при введении которых погибают все мыши, и последующие
разведения, при которых мыши не погибают.
Если использование 10-кратных разведений не приводит к гибели всех мышей ни в одном из
разведений, то для определения титра ботулинического токсина готовят 6- или 4-кратные разведения
исходной жидкости или жидкости, обработанной протеолитическим ферментом. По наибольшему раз
ведению жидкости, вызвавшему гибель всех мышей, вычисляют число мышиных MLD ботулиннчес-
кого токсина в 1 см’ исходной жидкости с последующим пересчетом на продукт (приложение 1).
255