ГОСТ 33645—2015
3.5.2 Уход и отбор личинок
3.5.2.1 После извлечения взрослых особей из резервуаров для разведения яйца собирают и
оценивают их жизнеспособность с использованием репрезентативного количества эмбрионов из всех
резервуаров для разведения. Отдельные икринки с наилучшим внешним видом (2-3 рекомендуется
оценить на качество нереста) следует сохранить, основываясь на жизнеспособности эмбриона и нали
чии достаточного количества (не менее 1500) эмбрионов. Все организмы, используемые в испытании,
должны исходить от одного нереста (т. е. нересты не должны смешиваться). Эмбрионы переносят
в большой плоский лоток или чашку, и все видимые мертвые или аномальные яйца (см. [6]) удаляют с
помощью лабораторной пипетки или глазной пипетки. Жизнеспособные эмбрионы из каждого из трех
нерестов переносят в три отдельных инкубационных резервуара. Через 4 сут после помещения в инку
бационные резервуары выбирают лучшую икру, основываясь на жизнеспособности и результатах инку
бации. и имеющееся количество личинок переносят в резервуардля культивирования при температуре
(22
±
1) °С. Кроме того, помещают некоторое количество дополнительных личинок в дополнительные
резервуары для возможной замены в случае, если в резервуаре для культивирования имеет место ги
бель в течение первой недели. Использование такой процедуры обеспечивает равномерную плотность
организмов и тем самым снижает вариабельность в развитии потомства одной икры. Все резервуары
для культивирования ежедневно очищают перекачиванием. В качестве меры предосторожности: ви
ниловые или нитриловые перчатки являются более предпочтительными по сравнению с латексными
перчатками. Погибших личинок ежедневно удаляют и их замещают добавлением новых личинок для
поддержания их плотности в течение первой недели. Кормление проводят не менее двух раз в сутки.
3.5.2.2 Перед воздействием испытуемого вещества головастиков адаптируют к условиям реаль
ной экспозиции, в том числе типу корма, температуре, циклу свет-темнота и культуральной среде. Таким
образом, рекомендуется использовать одну и ту же воду для культивирования/разведения перед воз
действием и во время воздействия. Если для поддержания головастиков перед воздействием
испытуе мого вещества используется статическая система культивирования, то культуральную среду
полностью заменяют не менее двух раз в неделю. Следует избегать скученности, вызванной высокой
плотностью личинок перед воздействием, поскольку это может заметно повлиять на развитие
головастиков в после дующем испытании. Таким образом, плотность при культивировании не должна
превышать примерно четыре головастика на 1литр культуральной среды (статическая система
воздействия) или 10 голова стиков на 1 литр культуральной среды (например, при скорости потока 50
мл/мин в системе перед воз действием или культивированием). В этих условиях головастики
развиваются от стадии 45/46 до стадии 51 в течение 12 сут. Репрезентативное количество головастиков
из этой исходной популяции ежедневно осматривают для определения стадии развития с целью
установления подходящей временной точки для начала воздействия. Следует соблюдать
осторожность, чтобы минимизировать стресс и травми рование головастиков, особенно во время
переноса, очистки аквариумов и манипуляций с личинками. Следует избегать стрессовых
условий/действий. например громких и/или сохраняющихся длительно звуков, постукивания по
аквариуму, вибрации в аквариуме, повышенной активности в лаборатории и резких изменений в
окружающей среде (доступности света, температуры. pH. концентрации раство ренного кислорода,
скорости протекания воды и т. д.) Если головастики не развиваются до стадии 51 в течение 17 сут
после оплодотворения, то возможной причиной этого является повышенный стресс.
3.5.3 Культивирование и кормление личинок
Головастикам скармливают, например. Sera Micron® (Sera GmbH. Heinsberg, Германия) на про
тяжении всего периода перед воздействием (после Nieuwkoop и Faber (NF) стадия 45/46) и в течение
всего периода испытания, составляющего 21 сут. или другой корм с такой же характеристикой в Оцен ке
трансформации земноводных. Режим кормления в период перед воздействием тщательно коррек
тируют с учетом потребностей развивающихся головастиков. То есть небольшие порции корма дают
только что вылупившимся головастикам несколько раз в день (не менее двух раз). Следует избегать
избыточного добавления корма для сохранения качества воды и предупреждения засорения жаберных
фильтров частицами корма и отложений. По мере роста головастиков ежедневные порции Sera Micron®
увеличивают примерно до 30 миллиграмм на особь в сутки незадолго до проведения испытания. При
валидации метода было показано, что промышленно доступный корм для головастиков Sera Micron®,
который поддерживает нормальный рост и развитие X. laevis. представляет собой мелкие твердые ча
стицы. остающиеся во взвешенном состоянии в толще воды в течение длительного периода времени и
подлежащие промывке потоком. Таким образом, общее суточное количество корма разделяют на
небольшие порции и скармливают не менее двух раз в день. Режим кормления с использованием Sera
Micron6’ описан в таблице 1. Нормы кормления регистрируют. Sera Micron® можно скармливать сухим
4