ГОСТ 33645—2015
стадией развития для достижения общего размера выборки из пяти личинок на повторность. Решение
отбирать дополнительных личинок со следующей более низкой или более высокой стадии развития
предпочтительно принимать, основываясь на общей оценке распределения по стадиям контрольных и
обработанных химическим веществом головастиков. То есть, если обработка химическим веществом
является причиной задержки развития, тогда отбирают дополнительных личинок со следующей более
низкой стадии. В свою очередь, если обработка химическим веществом связана с ускорением разви тия.
дополнительные личинки отбираются со следующей более высокой стадии.
4.2.7В случаях существенных изменений в развитии головастиков в результате воздействия ис
пытуемого химического вещества не может быть никакого совмещения стадии в группах с обработкой
химическим веществом с расчетной контрольной средней стадией развития. Только в этих случаях про
цесс отбора должен быть изменен согласно стадии, отличающейся от контрольной сродней стадии для
достижения выборки личинок соответствующей стадии для гистопатологического анализа щитовидной
железы. Кроме того, если стадии не поддаются точному определению (т. е. имеется асинхронность в
развитии), то произвольно отбирают по пять головастиков из каждой повторности для гистологического
анализа. Следует указать логическое обоснование отбора любых личинок, которые находятся на ста
дии. не совпадающей со средней стадией развития в контроле.
4.3 Определение биологических конечных точек
Во время 21-суточного периода воздействия проводят измерение основных конечных точек на
7-е и 21-е сутки, однако необходимо проводить ежедневное наблюдение за испытуемыми организмами.
В таблице 3 приведен обзор конечных точек измерений и соответствующих временных точек наблюде
ний. Более подробная информация по техническим процедурам измерения основных конечных точек и
гистологических исследований представлена в [10].
Т аб л ица 3 — Временные точки наблюдений для основных конечных точек в ОМЗ
Основные конечные точки
Ежедневно7-е сутки21-е сутки
Гибель
—
Стадия развития—
—
Длина задних конечностей——
Длина от кончика морды до клоаки—
—
Сырая масса тела—
—
Гистология щитовидной железы
—
4.4 Основные конечные точки
4.4.1 Стадия развития, длина задних конечностей. SVL и сырая масса тела являются основными
конечными точками ОМЗ, и каждая из них кратко описана ниже. Дополнительная техническая информа
ция для сбора этих данных имеется в рекомендуемых для использования приложенных руководствах,
включая процедуры компьютерного анализа.
4.4.2 Стадия развития
Стадия развития X. Laovis головастиков определяется с использованием критериев определения
стадии no Nieuwkoop и Faber [9]. Результаты определения стадии развития используются для опреде
ления того, происходит развитие с ускорением, асинхронно, с задержкой или без изменений. Ускорение
или задержка развития определяется сравнением средней стадии развития в контроле и в группах
головастиков с обработкой испытуемым веществом. Развитие определяется как асинхронное, когда
испытанные ткани не имеют уродств или аномалий, но относительное распределение во времени мор
фогенеза или развития различных тканей нарушается у одного головастика.
4.4.3 Длина задних конечностей
Дифференцировка и рост задних конечностей находятся под контролем гормонов щитовидной же
лезы и являются основными показателями развития, которые ранее использовались для определения
стадии развития. Развитие задних конечностей используется в определении стадии развития в виде
качественного показателя, но в данном стандарте оно принимается в виде количественной конечной
9