ГОСТ 33645—2015
100 мм), содержащую воду для разведения. Для определения стадии развития предпочтительно не
использовать анестезию, однако в противном случае можно провести индивидуальное обезболивание
головастиков с использованием 100 мг/л трикаина метансульфоната (например. MS-222), соответству
ющим образом забуференного бикарбонатом натрия (pH 7.0) перед обработкой. Если применяется ане
стезия с использованием, например. MS-222. то необходимо проконсультироваться в соответствующих
испытательных лабораториях по поводу применяемого метода и информировать об этом в отчете по
результатам испытания. С головастиками следует обращаться осторожно во время перемещения для
сведения к минимуму стресса и их травмирования.
4.1.2Стадия развития головастиков определяется с помощью бинокулярного микроскопа. Для
уменьшения вариабельности в определении конечной стадии развития, важно, чтобы определение воз
раста проводилось с максимально возможной точностью. Согласно [9]. основным признаком развития
организма для отбора головастиков со стадией развития 51 является морфология задних конечностей.
Морфологию задних конечностей следует исследовать под микроскопом. Несмотря на то что указания в
(9) по определению стадии развития должны быть приняты во внимание при определении стадии
головастиков, можно надежно определить стадию с использованием известных морфологических при
знаков. Следующая таблица может быть использована для упрощения и стандартизации определения
стадии развития в течение всего испытания с использованием известных морфологических признаков,
связанных с различными стадиями развития, полагая, что развитие происходит нормально.
Т аб л ица 2 — Известные морфологические признаки для определения стадий развития согласно Nieuwkoop и
Faber
Известные морфологичестие
признаки
Стадия развития
51525354
555657565960616263646566
Задние конечности
XXXX
XXX
Передние конечности
XXXXX
Черепно-лицевая структура
XXXX
Морфология обонятельного
нерва
XXX
Длина хвоста
XXXX
4.1.3Для начала испытания все головастики должны быть на стадии 51. Наиболее ярким морфо
логическим признаком этой стадии является морфология задних конечностей, показанная на рисунке 1.
Рисунок 1— Морфология задних конечностей X. Laevis головастика на стадии 51
7