ГОСТ 33645—2015
позиционные эффекты, включая незначительные отклонения в температуре, интенсивности света и
т. д. Обрабатываемые резервуары должны быть случайным образом распределены на позиции в си
стеме экспозиции с целью снижения потенциальных позиционных эффектов, включая незначительные
отклонения в температуре, интенсивности света (освещенности) и т. д. Используют люминесцентное
освещение для обеспечения светового цикла 12 ч свет :12 ч темнота при интенсивности в диапазоне от
600 до 2000 люкс (люмен/м2) на поверхности воды. Температура воды поддерживается на уровне (22
±
1) ’С, значение pH находится в диапазоне от 6,5 до 8.5, и концентрации растворенного кислорода (РК)
составляют более 3,5 мг/л (более 40 % насыщения воздухом) в каждом испытуемом резервуаре.
Температуру воды. pH и концентрацию растворенного кислорода измеряют минимум один раз в неде
лю: температуру предпочтительно измерять постоянно, по меньшей мере в одном испытуемом сосуде. В
приложении А приведены экспериментальные условия, в которых выполняется протокол. Для полу чения
дополнительной информации по установке проточной и/или статистической восстанавливаемой
системы воздействия можно обратиться к стандарту ASTM по проведению испытаний по острой ток
сичности химических веществ на рыбах, макробеспозвоночных и земноводных (5) и общим принципам
проведения токсикологических испытаний в водной среде.
3.4.2 Качество воды
Используется любая доступная местная вода (например, родниковая или водопроводная, про
фильтрованная через древесный уголь), обеспечивающая нормальный рост и развитие головастиков X.
laevis. Поскольку качество местной воды может существенно различаться от одного района к другому, то
проводят анализ качества воды, в частности, если отсутствуют архивныеданные о пригодности воды для
культивирования Xenopus. Особое внимание обращают на то. чтобы вода не содержала меди, хлора и
хлорамина, которые являются токсичными для лягушек и головастиков. Кроме того, рекомен дуется
анализировать воду на фоновое содержание фторида, перхлората и хлората (побочный продукт
дезинфекции питьевой воды), поскольку все эти анионы являются субстратами для транспортера йода в
щитовидной железе, и повышенный уровень каждого из этих анионов может оказать влияние на ре
зультаты испытаний. Анализ выполняют до начала испытания, и испытуемая вода не должна содержать
указанных анионов.
3.4.3 Концентрация йодида в испытуемой воде
Для того чтобы щитовидная железа могла синтезировать ТН. личинки должны быть обеспечены
достаточным количеством йодида через воду и источники питательных веществ. В настоящее время
отсутствуют эмпирически принятые нормы минимальных концентраций йодида. Однако присутствие
йодида может повлиять на реакцию системы щитовидной железы на активные вещества щитовидной
железы и. как известно, модулировать исходную активность щитовидной железы, вопрос, который за
служивает внимания при интерпретации результатов гистопатологического исследования щитовидной
железы. Таким образом, необходимо представить измеренные концентрации йодида в испытуемой
воде. На основе имеющихся результатов валидированных исследований протокол хорошо «работает»
при концентрации йодида (Г) в испытуемой воде в диапазоне от 0,5 до 10 мкг/л. В идеальных условиях
минимальная концентрация йодида в испытуемой воде должна составлять 0.5 мкг/л. Если воду, ис
пользуемую в испытании, разводят деионизированной водой, то добавляют йод в минимальной кон
центрации 0.5 мкг/л. В отчете указывают любое дополнительное внесение йода или других солей в
испытуемую воду.
3.5 Содержание организмов
3.5.1 Уход и культивирование взрослых особей
Уход и культивирование взрослых особей проводится в соответствии со стандартными руковод
ствами (5). и для получения более подробной информации можно обратиться к руководству для по
становки FETAX. В таких стандартных руководствах приводятся инструкции для надлежащего ухода и
методов культивирования, но строгого их соблюдения не требуется. Для стимуляции размножения
взрослым самкам и самцам (8-5 пар) вводят хорионический гонадотропин (ХГЧ). Самкам и самцам
вводят соответственно примерно 800-1000 ЕД и 600-800 ЕД ХГЧ. растворенного в 0.6-0.9 % физио
логическом растворе. Разведение самцов и самок проводится в большом резервуаре, в покое и стати
ческих условиях для обеспечения амлексуса. Каждый резервуар для культивирования имеет двойное
дно из нержавеющей стали или пластиковой сетки, что позволяет яичным кладкам опускаться на дно
резервуара.
Л
ягушки, которым ХГЧ был введен в конце дня. как правило, откладывают большую часть яиц
к середине утра следующего дня. После получения достаточного количества выделенных и опло
дотворенных яиц. взрослых особей удаляют из резервуаров для разведения.
3