Приложение А
(рекомендуемое)
ГОСТ 32635-2014
ФОРМУ
Л
Ы АНА
Л
ИЗА ЦИТОТОКСИЧНОСТИ
СВР1
1.При использовании ЦХВ оценка цитотоксичности основана на Индексе пролиферации при
цитокимезном-блоке (Cytokinesis-Block Proliferation Index (CBPI)) и индексе репликации (Replicative
Index (Rl)) (17. 59]. CBPI показывает среднее число клеточных циклов на клетку, в течение периода
экспозиции ЦХВ. Он может быть использован для подсчета клеточной пролиферации. RI показывает
относительное число ядер в обработанной культуре по сравнению с контрольной культурой и может
использоваться при расчете % цитостатичности:
Цитостатичность (%) = 100 - 100{(СВР1Т- 1)/(СВР1>.- 1)}
, ((число одноядерных клеток) + (2 х число двуядерных клеток) +(3 х число многядерных клеток))
= ---------------------------------------------------------------------------------------------------
(
--
о
---
б
---
щ
-----
е
---
е
---
ч
---
и
---
с
---
л
---
о
----
к
---
л
---
е
---
т
-----
о
---
к
---
)
---------------------------------------------------------------------------------------------------
Таким образом, при CBPI = 1 (все клетки с одним ядром) цитостатичность у 100% клеток.
Цитостатичность = 100-R I
((числодвуядерныхклеток)Т + (2х число многоядерлыхклеток) ,) + (общеечислоклеток)Т
((числодвуядерныхклеток)я +(2 х число мносоядерлых клеток) ) + (общеечислоклеток) я
где Т - культура с введением исследуемого вещества;
К - контрольная культура с растворителем.
2. Таким образом, RI 53% означает, что по сравнению с числом клеток, которые делятся,
образуя двуядерные и многоядерные клетки в контрольной культуре, только 53% от этого числа
делятся в обработанной культуре, т.е цитостатичность в 47%.
3. Эксперименты без использованияЦХВ. Оценку цитотоксичности рекомендуется
представлять в виде показателей относительного возрастания количества клеток (Relative Increase in
Cell Count) (RICC) или относительного удвоения популяции (Relative Population Doubling) (RPD) (59].
Оба показателя принимают во внимание долю клеток в популяции, которые делятся.
RICC =
(увеличение числа клеток в опытных культурах (начало - конец)
х 100
(увеличение числа меток в контрольных культурах (начало - конец)
i \ i U
= ““““““““^^^^^
1ии
_
“
Судвоение популяции в опытных культурах)
(удвоение популяции в контрольной культуре)
где:
Удвоение популяции = [log(число клеток после обработки)+ (начальное число меток)] -s-log 2
4. Таким образом. RICC или RPD 53% показывает 47% цитотоксичности/цитостатичности.
5. Используя индекс пролиферации (Proliferatin Index) (PI), цитотоксичность может быть
рассчитана через подсчет числа клонов, состоящих из 1 клетки (с11), 2 клеток (с12). 3-4 клеток (с14) и 5-8
клеток (с18)
p j _ (0 ХС1!)+(2хс12)+(Зхс14)+(4хс18))
”(с11+с12 + с14 + с18)
6. PI используется как реальный параметр цитотоксичности для клеточных линий,
культивируемых in situ в отсутствии ЦХВ [26. 27, 28. 29].
11