ГОСТ 32042— 2012
7 Определение содержания витаминов В1 (тиамина) и В2 (рибофлавина)
методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
7.1 Сущность метода заключается в экстракции витаминов Bi (тиамина) и В* (рибофлавина) из
анализируемой пробы премикса раствором соляной кислоты и определении их содержания на
жидкостном хроматографе со спектрофотометрическим детектором с использованием обращенно-
фазного режима элюирования.
Метод применим при содержании витамина Bf в премиксе в диапазоне измерений от 50 до 500
г/т. витамина Вг - в диапазоне измерений от 100 до 2000 г/т.
7.2 Средства измерений, оборудование, материалы и реактивы
Хроматограф жидкостный, укомплектованный спектрофото-метрическим детектором, пригодным
для измерения оптической плотности при длине волны 254 нм. самописцем или интегратором, позво
ляющим измерять высоту и площадь пиков, и компьютером с установленным программным
обеспе чением для обработки результатов измерений.
Колонка хроматографическая стальная или стеклянная высотой 150 мм и диаметром 4 мм с
числом теоретических тарелок не менее 2000. заполненная сорбентом «Силасорб С-18» или «Сепа-
рон С-18».
Спектрофотометр со спектральным диапазоном от 186 до 1100 нм.
Весы лабораторные по ГОСТ 24104 с наибольшим пределом взвешивания 200 г и допускаемой
погрешностью ± 0,001 г.
pH-метр любого типа с пределом допускаемой погрешности± 0,1 ед. pH.
Мешалка магнитная типа ММ-5.
Центрифуга лабораторная с числом оборотов не менее 6000 в мин.
Мономер со стеклянным электродом с пределом допускаемой погрешности ± 0.05 ед. pH.
Баня водяная.
Микрошприц или микропипетка.
Колбы конические со шлифом Кн-2-100-14/23 ТХС по ГОСТ 25336.
Колбы мерные 2-25(50. 100. 200)-1(2) по ГОСТ 1770.
Пипетки градуированные 6(7>-1(2)-10 по ГОСТ 29227 и ГОСТ 29228.
Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026.
Воронка для фильтрования ВФ-1-56{75) ХС со стеклянным фильтром ФКП-56{75) ПОР 100 ХС
или ВФ-2-75(110) ХС со стеклянным фильтром ФКП-75{110) ПОР 100 ХС по ГОСТ 25336.
Ацетонитрил с массовой долей не менее 99.98 %.
Натрия октилсульфонат, хроматографически чистый.
Кислота ортофосфорная по ГОСТ 6552.
Кислота соляная по ГОСТ 3118. концентрированная и раствор молярной концентрации с(НС1) =
0.01 моль/дм3.
Витамин В, (тиамимхлорид гидрохлорид) с массовойдолей не менее 99,0 %.
Триэтиламин с массовой долей не менее 99.5 %.
Витамин Вг (рибофлавин) с массовой долей не менее 99.0 %.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
П р и м е ч а н и я
1 Допускается использование других средств измерений и оборудования с техническими и
метрологическими характеристиками не ниже указанных.
2 Все реактивы должны быть квалификации х. ч. или ч. д. а.
7.3 Подготовка к испытанию
7.3.1 Приготовление элюента
В мерной колбе вместимостью 1000 см3смешивают 700-800 см3дистиллированной воды и 120
см’ ацетонитрила, добавляют 2.5 см3триэтиламина, 0.5 г октилсульфоната натрия и приливают ор-
тофосфорную кислоту до pH равного 7,6 ед. pH. Объем доводят дистиллированной водой до метки.
Полученную смесь фильтруют через стеклянный фильтр для удаления механических примесей.
Срок хранения элюента - не более 1 мес.
7.3.2 Приготовление раствора-экстрагента
В мерной колбе вместимостью 1000 см3смешивают небольшое количество дистиллированной
воды с 0.8 см3 концентрированной (37 %-ной) соляной кислоты. Объем доводят дистиллированной
водой до метки. pH раствора (2.0 ± 0.2) ед. pH.
6