ГОСТ 32042— 2012
Витамин В5(никотиновая кислота) с массовой долей не менее 99,0 %.
Фенолфталеин.
Триметиламин.
Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
П р и м е ч а н и я
1 Допускается использование других средств измерений и оборудования с техническими и
метрологическими характеристиками не ниже указанных.
2 Все реактивы должны быть квалификации х. ч. или ч. д. а.
10.3.2 Подготовка к испытанию
10.3.2.1 Приготовление элюента для хроматографии
Трехкомпонентный элюент готовят смешиванием уксусной кислоты, дистиллированной воды и
триметиламина в соотношении 3 : 95 : 2 по объему. Для этого в мерную колбу вместимостью 500 см3
вносят пипеткой 15 см3 концентрированной уксусной кислоты, затем цилиндром вносят 100
см3дистиллированной воды и перемешивают. Добавляют 10 см3триметиламина. перемешивают,
доводят объем дометки дистиллированнойводой и сноватщательно перемешивают.
Приготовленный раствор фильтруют через стеклянный фильтр ПОР 16 и помещают в склянку с
притертой пробкой.
Срок хранения элюента в холодильнике при температуре 4 °С - 5 °С - не более 1 мес.
10.3.2.2 Подготовка хроматографической колонки
Через колонку пропускают элюент в количестве 20-30 свободных объемов колонки, т. е. два
полных шприца насоса хроматографа при расходе элюента сначала 50 мм3/мин, а затем 100 мм3/мин.
Промывку колонки заканчивают при получении стабильной нулевой линии.
После стабилизации колонки проводят ее насыщение витамином В*- Для насыщения колонки в на
чале работы проводят от трех до пяти загрузок рабочего стандартного раствора и отмечают высоты
пиков. При достижении постоянной высоты приступают к испытаниям.
10.3.2.3 Приготовление раствора серной кислоты молярной концентрации
с(Уг
H2S0*) = 5
моль/дм3
В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 30-40 см3 дистиллированной воды и
добавляют 14.2 см3концентрированной серной кислоты. Осторожно перемешивают и добавляют еще
35-40 см3 дистиллированной воды. Когда раствор остынет до комнатной температуры, осторожно
доводят объем дистиллированной водой до метки.
10.3.2.4 Построение градуировочного графика
В коническую колбу вместимостью 200 см3 помещают 0.1 г витамина В5и приливают 70 см3
раствора соляной кислоты молярной концентрации с(НС1) = 0.1 моль/дм3. Колбу помещают в
водяную баню и нагревают в течение 10 мин при температуре 75 °С. Затем ее охлаждают,
добавляют1-2 капли 1 %-ного спиртового раствора фенолфталеина, по каплям раствор
гидроокиси натрия с массовой долей 40 % до образования розового окрашивания. Избыток
щелочи нейтрализуют раствором серной кислоты молярной концентрации
с(У> H2S04) = 5
моль/дм3.
Раствор фильтруют через бумажный фильтр с синей лентой в мерную колбу вместимостью 100 см3и
доводят объем до метки дистиллированной водой. Получают основной стандартный раствор
витамина Bs массовой концентрации 1 мг/см3.
Из этого раствора готовят рабочие стандартные растворы, содержащие 0,4; 0,8: 1.0; 1.5: 2.0 и
3.0 мг витамина В5в 50 см3. Для этого соответственно 0.4; 0.8: 1.0; 1,5; 2.0 и 3,0 см3основного стан
дартного раствора помещают в шесть мерных колб вместимостью 50 см3 и доводят их объемы
до метки дистиллированной водой.
Срок хранения рабочих стандартных растворов в холодильнике в склянках с притертыми проб
ками при температуре 4 °С - 5 °С - не более1 мес.
Рабочие стандартные растворы анализируют на жидкостном хроматографе при следующих
условиях.
- хроматографическая колонка размером 2 * 120 мм. заполненная сорбентом:
- трехкомпонентный элюент на основе уксусной кислоты (см. 10.3.2.1);
- объем пробы - 6 мм3;
- длина волны - 260 нм:
- скорость подачи элюента - 80-100 мм3/мин;
- постоянная времени - 0.2 с.
Удерживаемый объем пика витамина В5- 560-580 мм3(может меняться в зависимости от раз
меров колонки и плотности ее заполнения). Каждый раствор хроматографируют два раза. После
выхода пика колонку
15