ГОСТ 28038-2013
лянный стакан, смешивают с небольшим количеством дистиллированной воды и количественно пе
реносят в мерную колбу вместимостью 250 см3. В мерную колбу вносят 15 см3 раствора Карреза I и 15
см3раствора Карреза II. Содержимое колбы доводят дистиллированной водой до метки, тщатель но
перемешивают и фильтруют в мерный цилиндр через бумажный складчатый фильтр.
5.4.2 Экстракция
Цилиндром отмеряют 50 см3фильтрата и переносят его в делительную воронку. Этим же ци
линдром отмеряют 50 см3этилацетата, переносят его в делительную воронку и в течение 1 мин ин
тенсивно перемешивают содержимое. Смеси дают отстояться и после полного разделения водный
нижний слой сливают обратно в цилиндр, а этилацетатный экстракт переносят в сухую плоскодонную
колбу. Экстрагирование остатков патулина из водной фазы проводят еще раз в аналогичных услови ях
свежей порцией этилацетата. При этом после одноминутного перемешивания в делительную во ронку
вносят 10 г хлористого натрия и продолжают перемешивать еще в течение 0.5 мин. После раз деления
слоев водную фазу отбрасывают, а объединенные этилацетатные экстракты обезвоживают в
плоскодонной колбе добавлением 15-20 г сернокислого натрия. После обезвоживания экстракт
фильтруют через ватный тампон в отгонную грушевидную колбу. Оставшийся сернокислый натрий
ополаскивают двумя порциями этилацетата объемом по 10 см3, которые затем также фильтруют в
отгонную колбу. Экстракт выпаривают на ротационном испарителе при температуре не выше 40 °С до
объема около 1 см3.
5.4.3 Очистка экстракта
На дно стеклянной колонки помещают ватный тампон, поверх которого насыпают слой серно
кислого натрия толщиной 5 мм. В колонку вносят суспензию 2 г силикагеля с 15 см3бензола. Не давая
просохнуть слою силикагеля, поверх него насыпают слой сернокислого натрия толщиной 10 мм. Бен
золу дают стечь, после чего на верхний слой сернокислого натрия наносят экстракт, подготовленный по
5.4.2. Экстракту дают полностью впитаться в фильтрующий слой. Отгонную колбу ополаскивают 0.5
см3 этилацетата. смыв переносят на колонку и дают ему полностью впитаться в фильтрующий слой.
В колонку вносят 25 см3 бензола, дают ему полностью пройти через фильтрующий слой, вы
ходящий элюат отбрасывают. В колонку вносят 100 см3смеси бензола с этилацетатом (3 : 1). С этого
момента начинают отбирать выходящий элюат. После прекращения выхода растворителя из колонки
элюат переносят в остродонную колбу и выпаривают на ротационном испарителе при температуре не
более 40 °С до объема около 0,5 см3. Остаток растворителя удаляют в слабом токе азота при ком
натной температуре. Сухой остаток в отгонной колбе растворяют в 0,2 см3смеси бензола с ацетонит
рилом (объемное соотношение 9 : 1 ) . Полученный раствор используют для хроматографического
анализа.
5.4.4Хроматографическое разделение
Пластинку для тонкослойной хроматографии на расстоянии 2 см от краев размечают тонкими
карандашными линиями. В точку пересечения линий в правом нижнем углу наносят с помощью мик
рошприца 0,02 см3 раствора пробы для хроматографического анализа по 5.4.3. В правом верхнем и
левом нижнем углах на стартовых линиях отмечают по три точки, в которые микрошрицем наносят от
0.01 до 0,08 см3градуировочного раствора патулина так. чтобы масса патулина в пятнах варьировала
вдиапазоне от 10 до 80 нг. Пластинку одной из стартовых линий вниз помещают в камеру для тонко
слойной хроматографии, предварительно заполненную смесью хлороформ-ацетон (объемное соот
ношение 4 : 1) на высоту около 1 см. Развитие хроматограммы проводят в первом направлении до
достижения фронтом растворителя карандашной линии. Пластинку извлекают из камеры и выдержи
вают в вытяжном шкафу до исчезновения запаха растворителя. Высушенную пластинку помешают
второй стартовой линией вниз в камеру для тонкослойной хроматографии, предварительно запол
ненную смесью толуол-этилацетат-муравьиная кислота (объемное соотношение 5 : 4 : 1) на высоту
около 1 см. Проводят развитие хроматограммы во втором направлении до достижения фронтом рас
творителя карандашной линии. Пластинку извлекают из камеры и выдерживают в вытяжном шкафу
до исчезновения запаха растворителя.
5