ГОСТ 31659—2012
Приложение В
(обязательное)
Состав и приготовление питательных сред и реактивов
В.1 Забуференная пелтонная вода
В.1.1 Состав:
- пептон — 10,0 г;
- хлористый натрий — 5.0 г;
- двузамещенный фосфорнокислый натрий 12-водный (NB
j
HPO* -12Н.,0) — 9.0 г.
- однозамещенный фосфорнокислый калий (КН2Р 04) — 1.5 г;
- вода — 1000 см3.
В.1.2 Приготовление
При нагревании компоненты растворяют в воде. Устанавливают такой pH. чтобы после стерилизации он со
ставлял (7.0 ± 0.2) при температуре 25 *С. Среду разливают во флаконы подходящей вместимости с учетом добав
ления необходимой навески продукта. Если навеска равна 25 г. то забуференную пептонную воду разливают по 225
см3. Стерилизуют 15 мин в автоклаве при температуре (121 ± 1) °С.
В.2 Среда Ралпапорта—Вассилиадиса с соей (RVS-бульон)
В.2.1 Раствор А
6.2.1.1 Состав.
- ферментативный гидролизат сои — 5.0 г;
- хлористый натрий — 8.0 г;
- фосфорнокислый однозамещенный калий (КН2РО<) — 1.4 г.
- фосфорнокислый двузамещенный калий (КгНР04) — 0.2 г;
- вода — см3.
В.2.1.2 Приготовление
Компоненты растворяют в воде при нагревании до температуры около 70 °С. Раствор готовят за день до при
готовления RVS-бульона.
В.2.2 Раствор В
В.2.2.1 Состав.
- хлористый магний 6-водный (MgCi2 6НгО) — 400 г:
- вода — 1000 см3.
В.2.2.2 Приготовление
Хлористый магний растворяют в воде. Поскольку эта соль очень гигроскопична, рекомендуется из новой от
крытой упаковки растворять ее по определенной схеме. Например, к 250 г хлористого магния 6-водного добавляют
625 см3 воды, получая раствор объемом 788 см3 массовой концентрации 31.7 г/100 см3. Состав раствора соотве
тствует В.2.2.1. Раствор переносят в бутылку из темного стекла с притертой пробкой и хранят при комнатной темпе
ратуре не более двух лет.
В.2.3 Раствор С
В.2.3.1 Состав.
- малахитовый зеленый оксалат — 0.4 г.
- вода — 100 см1.
В.2.3.2 Приготовление
Малахитовый зеленый оксалат переносят вфарфоровую ступкуи постепенно растворяют в воде. Раствор пе
реливают в мерную колбу вместимостью 100 см3 и доводят водой до метки. Раствор переносят в бутылку из темно го
стекла, хранят при комнатной температуре не более 8 мес.
В.2.4 Готовая среда
В.2.4.1 Состав.
- раствор А (см. В.2.1) — 1000 см1;
- раствор В (см. В.2.2) — 100 см3;
- раствор С (см. в.2.3) — 10 см3.
В.2.4.2 Приготовление
Прибавляют к 1000 см3раствора А 100 см3раствора В и 10 см3 раствора С. Устанавливают такой pH. чтобы
после стерилизации он составлял (5,2 ±0.2). Перед использованием среду разливают по пробиркам по 10 см3. Сте
рилизуют 15 мин в автоклаве при температуре (115 г 1) “С. Рекомендуется использовать среду вдень приготовле
ния. При необходимости допускается готовую среду хранить по ГОСТ 10444.1.
Следует учитывать, что на этой среде не растет S. Typhi.
П р и м е ч а н и е — Конечный состав среды, ферментативный гидролизат сои — 4.5 г/дм1; хлористый на
трий — 7.2 г/дм1: фосфорнокислый однозамещенный калий — 1.26 г/дм3, фосфорнокислый двузамещенный ка-
13