ГОСТ 31659—2012
8.5.3.1 Общие положения
Петлей инокулируют специфические среды, указанные в 8.5.3.2—8.5.3.9. каждой культурой, полу
ченной из колоний по 8.5.2.
8.5.3.2 TSI-arap (см. 5.2.10). среда Олькеницкого или агар Клиглера
Засевают штрихом скошенную поверхность агара (среды Олькеницкого) и уколом — столбик.
Инкубируют при температуре (37
1
1) °С в течение (24 1 3) ч.
Интерпретируют изменения в среде следующим образом:
а) столбик агара (среды Олькеницкого)
- желтый — глюкоза положительная (глюкозу ферментирует);
- красный или неизменившийся — глюкоза отрицательная (глюкозу не ферментирует);
- черный — образование сероводорода;
- пузырьки или разрывы — образование газа из глюкозы;
б) скошенная поверхность агара (среды Олькеницкого)
- желтая — лактоза и/или сахароза положительные (лактозу и/или сахарозу ферментирует);
- красная или ноизменившаяся — лактоза и сахароза отрицательные (ни лактозу, ни сахарозу не
ферментирует).
Агар Клиглера содержит два сахара, поэтому по скошенной поверхности учитывают только фер
ментацию лактозы.
Типичные культуры бактерий рода Salmonella показывают щелочную (красную) поверхность и кис
лый (желтый) столбик с образованием газа (пузырьков), и примерно в 90% случаев образуется серово
дород (черный агар).
Если изолированы лактозоположительные бактерии рода Salmonella, то поверхность TSI-arapa
желтая. Предварительное определение культур бактерий рода Salmonella не может основываться толь ко
на результатах теста на TSI-arape.
Дальнейшему изучению подвергают также лакгозоположительные бактерии или бактерии, не об
разующие сероводород, но обязательно ферментирующие глюкозу с образованием или без образова
ния газа.
8.5.3.3 Агар с мочевиной (агар Кристенсена) (см. 5.2.11)
Культуры пересевают штрихом на поверхность агара Кристенсена с мочевиной. Посевы инкубиру
ют при температуре (37 ± 1) вС в течение (24 i 3) ч. наблюдая за посевами через определенные проме
жутки времени.
При положительной реакции — расщеплении мочевины с выделением аммония цвет фенолового
красного меняется от розового до светло-вишневого.
Дляуреазоположительныхбактерий реакция частостановится видимой после2 ч инкубирования.
Бактерии рода Salmonella не расщепляют мочевину.
8.5.3.4 L-лизиндекарбоксилазная среда (см. 5.2.12)
Инокулируют снизу жидкую среду. Посевы инкубируют при температуре (37» 1)9С в течение
(24 i 3) ч.
Помутнение и пурпурный цвет среды после инкубирования указывают на положительную реакцию.
Желтый цвет указывает на отрицательную реакцию.
Salmonella Paratyphi А не образует L-лизиндекарбоксилазу. остальные образуют.
8.5.3.5 Определениер-галактозидазы (5.2.13)
Суспендируют петлей культуру в 0.25 см3физиологического раствора, прибавляют одну каплю то
луола ивстряхивают пробирку. Помещают пробирку в водяную баню при температуре 37 °С и оставляют
примерно на 5 мин. Затем добавляют 0.25 см3реактива для определенияр-галактозидазы и перемеши
вают.
Оставляютпробирку в водяной бане при температуре 37 вС в течение (24 ± 3) ч. наблюдаяза изме
нением цвета через определенные промежутки времени.
Желтый цвет указывает на положительную реакцию. Изменение цвета обнаруживается примерно
через 20 мин.
Бактерии рода Salmonella, кроме S. arizortae, не обладают р-галактозидазой.
Для определения р-галактозидазной активности допускается использование ONPG-дисков. Для
этого испытуемые культуры высевают на среду, содержащую лактозу в концентрации 0,1 %. или агар
Клиглера. или трехсахарный агар, или агар Олькеницкого. Посевы инкубируют в течение (18
1
2) ч при
температуре (37±1)°С. Петлей отбирают выросшую культуру и готовят из нее густую суспензию в
7