ГОСТ ISO 11133-2—2011
-1 соответствует слабому росту и
- 2 соответствует значительному росту.
Целевые микроорганизмы должны оцениваться в 2 балла и иметь типичный внешний вид. размер и
морфологию колоний. Рост нецелевых микроорганизмовдолжен быть частично или полностью ингибирован
(Оили 1).
5.4 Методы, применяемые в отношении жидких культуральных сред
5.4.1 Общие положения
Для определения производительности жидкой среды необходимо использовать подходящий иноку
лят. Количественный, полуколичественный и качественный методы, описанные ниже, позволяют оценить
производительность и селективность. Предлагаемые методы регистрируют степень роста после надлежа
щей инкубации путем культивирования или штрихового посева из жидких сред на агаровые среды и под
счета колониеобразующих единиц (КОЕ) или вычисления баллов для жидкой среды. В случае качествен
ных методовдля жидких сред характеристические реакции оценивают визуально.
5.4.2 Количественный метод разбавления для целевых и нецелевых микроорганизмов
Данный метод также пригоден для оценивания новых культуральных сред или разбавителей.
5.4.2.1 Процедура
Отбирают нужное число пробирок или порций по 10см3каждой партии испытуемой жидкой среды.
Инокуляция целевых микроорганизмов: инокулируют испытуемый бульон и эталонный бульон, ис
пользуя каждый тест-микроорганизм с малым содержанием (например, от 10до 100 КОЕ в каждой пробир
ке; о приготовлении инокулята см. 5.2.1). и перемешивают.
Инокуляция нецелевых микроорганизмов: инокулируют испытуемый бульон и эталонный бульон, ис
пользуя каждый тест-микроорганизм с более высоким содержанием (> 1000 КОЕ в каждой пробирке; о
приготовлении инокулята см. 5.2.1), и перемешивают.
Инокуляция целевых и нецелевых микроорганизмов как смешанной культуры; для испытаний сме
шанных культур вселективных средах инокулируют испытуемый бульон и эталонный бульон малым коли
чеством целевых микроорганизмов (например, от 10 до 100 КОЕ на каждую пробирку; о приготовлении
инокулята см. 5.2.1) и в ту же пробирку вносят значительное количество нецелевых микроорганизмов (>
1000 КОЕ в каждую пробирку; о приготовлении инокулята см. 5.2.1). и перемешивают.
Инокуляция целевых и нецелевых микроорганизмов вразбавителях и транспортных средах: инокули
руют разбавители тест-микроорганизмами (например, от 100до 1000 КОЕ в каждую пробирку; о приготов
лении инокулята см. 5.2.1), и перемешивают.
Соблюдают время и температуру инкубации, установленные в стандартных методах.
Разбавителидолжны инкубироваться втечение 45 мин при комнатной температуре и затем быть раз
литы по чашкам. Транспортные среды должны инкубироваться при соответствующей температуре и нуж
ное время в соответствии с обычным использованием и затем быть разлиты по чашкам.
Берут аликвотный объем или. при необходимости, разбавление каждого бульона после инкубации и
распределяют в чашке с неингмбирующим агаром, как это описано в 5.3.1.
П р и м е ч а н и е — Для испытаний смешанных культур необходимо проводить распределение, когда
это возможно, на чашках с неовлективным агаром, которое позволяет достичь дифференциации микроорга
низмов в смешанной культуре (например, для подсчета видов Escherichia coli и Salmonella используется агар
для чашечного подсчета с MUG). В случае, когда невозможно различить смешанные культуры на
несепектив-ном агаре, следует использовать среды с селективным агаром при условии, что были предварительно
испытаны их эксплуатационные характеристики.
5.4.2.2 Снятие результатов, расчеты и интерпретация
После инкубации проводят подсчет колоний целевых и нецелевых микроорганизмов в случае, если в
смешанных культурах можно различить разные типы. Расчеты и интерпретацию следует проводить с уче
том цели исследования;
^сравнительная интерпретация между эталонным и испытуемым бульонами, используя значения
PR
и Sf , как это описано в 4.2.3.2 и 4.2.3.3:
- для целевых микроорганизмов
PR
не должен быть < 0.1 (разница в росте не превышает одного
порядка величины);
- для нецелевых микроорганизмов
SF
должен достигать по меньшей мере 2;
- в смешанных культурах рост целевых микроорганизмов не должен ингибироваться нецелевыми
микроорганизмами, т. е. целевые микроорганизмы должны всегда бытьдоминирующей популяцией;
7