С. 8 ГОСТ 25755-91
После нанесения исследуемого материала фильтры высушива
ют при 68 X в течение 10 мни. Затем замачивают в течение 10 мин
при 20 X в 100 см3 раствора А и помещают в полиэтиленовый
пакет с 10 см9 буферного раствора М I. Пакет с капроновым
фильтром запаивают и помещают на I ч в термостат при 68 °С.
На обезжиренные стекла размером 15X15 см наносят 0.6 см1
рабочего разведения згР-ДНК-зоида. Извлеченный из полиэтиле
нового пакета фильтр помещают лицевой стороной на стекло с
нанесенным зондом и аккуратно протирают его для удаления пу
зырьков воздуха
Стекло с притертым фильтром помещают в стерилизатор с по
догретым до 80°С вазелиновым маслом так, чтобы масло покры
ло фильтр. Стерилизатор выдерживают 20 мин в сушильном шка фу
при 80°С. затем шкаф отключают и, не открывая, оставляют
остывать до 55X . После этого шкаф открывают и охлаждают до
комнатной температуры.
Отделяют фильтр от стекла, обезжиривают его в хлороформе,
ополаскивают в 50 см3 раствора Б и выдерживают 10 мни при
20 X в новой порции (150 см3) раствора В. Далее капроновый
фильтр промывают при 20X в 200 см3 раствора В и трехкратно
в течение 15 мин (со сменой раствора) в 160 см3 раствора Г при
68 X. Затем высушивают между листами фильтровальной бумаги
при 68 X в течение 15 мин.
Для получения радиоавтографа капроновый обработанный
фильтр накладывают лицевой поверхностью на эмульсионный слой
рентгеновской пленки,помещаютвметаллическую кассету и
экспонируют 14—16 ч при 20 X
Удаляют капроновый фильтр, а рентгеновскую пленку обще
принятым способом проявляют, фиксируют, высушивают на возду
хе. Работы с рентгеновской пленкой проводят в темной комнате
при красном свете.
2.3.4. Оценка результатов
Результаты исследования учитывают визуально. Положитель ный
результат характеризуется наличием темного пятна на рент
геновской пленке в месте контакта ее с нанесенным на капроно
вый фильтр исследуемым материалом, сопоставимого по контра
стности с положительным контролем (клетки 1—2) н отсутствием
потемнения пленки при отрицательном контроле (клетки 3—4).
При отрицательном результате на месте контакта с исследуемым
материалом пленка остается прозрачной.
Получение положительного результата свидетельствует о кон
таминацииисследуемого материала вирусом ИРТ. В комплексе с
клиническими и эпизоотологнческнми данными служит осно
ванием для постановки диагноза на инфекционный рннотрахоит.
2.4. Ме т о д и м м у н о ф л у о р е с ц е н ц и и
Сущность метода заключается в обнаружении с помощью флу-